[發(fā)明專利]一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810988764.4 | 申請日： | 2018-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN109206532B | 公開（公告）日： | 2021-05-07 |
| 發(fā)明（設計）人： | 黃儒強;王靜輝;王倩;高林林;張競雯 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南師范大學 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭煒綿 |
| 地址： | 510631 廣東省廣州市天河*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 桃金娘 果實 提取 分離 純化 多糖 方法 | ||
1.一種從桃金娘果實中提取并分離純化多糖的方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)將桃金娘果實烘干并粉碎，取其干粉和蒸餾水于回流裝置中煮沸提取數(shù)次，合并提取液并減壓濃縮，在濃縮液中加入數(shù)倍體積的95％(V/V)乙醇，不斷攪拌使多糖均勻沉淀，然后在4℃下靜置12h以上，離心收集沉淀，烘干后得桃金娘果實粗多糖；
(2)取桃金娘果實粗多糖加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH值至8.0，然后一邊滴加30％H2O2溶液，一邊攪拌，直至溶液顏色變淺，隨后在50℃水浴下保溫2h；
(3)在脫色后的多糖溶液中加入該溶液1/5體積的Sevag試劑，振蕩培養(yǎng)20min，靜置10min后離心，棄去下層有機相和中間層蛋白質(zhì)與氯仿和正丁醇生成的凝膠物，重復該離心和棄去有機相、凝膠物的操作若干次；最后一次操作后，旋蒸除去溶液中殘留的Sevag試劑，得到脫蛋白后的桃金娘果實多糖溶液，按步驟(1)的醇沉法收集沉淀，烘干后得初步純化的桃金娘果實多糖；
(4)DEAE-瓊脂糖凝膠填料經(jīng)預處理后裝柱，步驟(3)的初步純化的桃金娘果實多糖用去離子水溶解后過0.45μm微孔濾膜，然后上柱；用梯度濃度的NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用苯酚-硫酸法檢測洗脫液在檢測波長為490nm的吸光度值，根據(jù)洗脫曲線合并相同流分，濃縮、透析、凍干，分別得到多糖P1、P2、P3和P4；
所得四種多糖的分子量如表1所示：
表1 桃金娘果實多糖純化組分的分子量
所得四種多糖的單糖組成如表2所示：
表2 桃金娘果實多糖純化組分的單糖組成
步驟(4)所述的NaCl溶液，梯度是0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mol/L；
步驟(4)所述的上柱 和洗脫流速為0.5mL/min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)所述的透析，是將濃縮后的流分轉(zhuǎn)入透析袋中于4℃透析48h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)所述的Sevag試劑，是由氯仿和正丁醇按體積比5:1組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)所述的煮沸提取，每次的提取時間為4h。
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