[發明專利]一種含冬青素A的提取物及其提取方法

有效

• 申請號: 201810986658.2
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109053851B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王媛媛
• 申請（專利權）人: 江蘇海鑰醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 孫海杰

本發明涉及天然藥物的提取技術領域，尤其是涉及一種含冬青素A的提取物及其提取方法。提取方法包括如下步驟：以乙醇溶液為溶劑，對海南冬青葉回流提取，收集提取液濃縮，得到濃縮液，調節濃縮液pH至2?3；以大孔吸附樹脂為填料，依次采用10?30％乙醇溶液、70?90％乙醇溶液對濃縮液進行洗脫；對70?90％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液回收濃縮得到清膏，加硅膠拌勻，減壓干燥，得到拌樣粉；將拌樣粉上硅膠柱，進行超臨界洗脫；收集洗脫液，結晶、干燥，得到含冬青素A的提取物。本發明對冬青素A的提取，純度可達70％以上，總三萜含量95％以上，兼顧降低了雜質的含量，解決了現有技術中工藝繁瑣、純度低的問題。

技術領域

本發明涉及天然藥物的提取技術領域，尤其是涉及一種含冬青素A的提取物及其提取方法。

背景技術

中藥或天然藥物以其獨到的療效在防治惡性腫瘤方面顯示出巨大潛力，海南冬青(Ilex hainanensis Merr.)系廣西壯族、瑤族民間使用歷史悠久的中草藥，主要分布于廣東、廣西、海南、貴州、云南等地，收載于《廣西中藥材標準》、《廣西壯藥質量標準》、國家《藥典》附錄，具有清熱解毒、平肝潛陽、活血化瘀等功效。民間通常作茶飲。

海南冬青葉中主要包括黃酮類、咖啡酰奎寧酸類、三萜酸類、三萜皂苷類、揮發油和有機酸等成分。其中，經研究發現，冬青素A(Ilexgenin A，IA)作為一種五環類三萜類化合物，對肝癌細胞株HepG2細胞等增殖具有抑制作用，具有較好的抗腫瘤應用前景。

但是作為潛在藥物開發，冬青素A的分離制備存在著工藝繁瑣、純度低的現狀。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種含冬青素A的提取物的提取方法，所述方法通過樹脂-超臨界分離色譜耦合技術，在短周期內即可完成冬青素A的提取，且純度可以達到70％以上，并且，同時兼顧降低了雜質的含量，解決了現有技術中存在的冬青素A的分離制備工藝繁瑣、純度低的問題。

本發明的第二目的在于提供一種含冬青素A的提取物，所述提取物中，冬青素A的純度可達到70％以上，并且總三萜類成分含量高于95％，且其中現有技術中難以分離的烏索酸的含量低，如后續需進一步提純，降低后續對冬青素A進一步提純的難度。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種含冬青素A的提取物的提取方法，包括如下步驟：

(a)以乙醇溶液為溶劑，對海南冬青葉回流提取，收集提取液濃縮，得到濃縮液，調節濃縮液pH至2-3；

(b)以大孔吸附樹脂為填料，依次采用10-30％乙醇溶液、70-90％乙醇溶液對所述濃縮液進行洗脫；

(c)對所述70-90％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液回收濃縮得到清膏，加硅膠拌勻，減壓干燥，得到拌樣粉；

(d)將拌樣粉上硅膠柱，進行超臨界洗脫，流動相為超臨界CO₂和乙醇溶液；收集洗脫液，結晶、干燥，得到所述含冬青素A的提取物。

本發明所述的提取方法，選用的原料海南冬青葉是純天然植物，以乙醇溶液作為溶劑進行提取，能夠充分提取出海南冬青葉中的冬青素A，同時避免其它不必要雜質的溶出；同時，根據乙醇溶液提取得到的提取液中的成分，采用大孔吸附樹脂進行吸附、分離純化，利用冬青素A與樹脂的吸附作用及冬青素A自身分子量的大小，采用特定比例的洗脫劑，除雜并純化冬青素A。大孔樹脂通過物理吸附，有選擇性的吸附冬青素A。通過大孔吸附樹脂的洗脫分離后，除去濃縮液中的強極性產物，將洗脫液加硅膠拌樣得拌樣粉，再上硅膠柱，經超臨界CO₂-乙醇洗脫，利用冬青素A和其它相對較弱極性的成分在超臨界CO₂-乙醇中不同的溶解度和硅膠不同的吸附作用，分別洗脫出來，進一步分離純化。