[發明專利]一種重組載體CAR-CD244-antiPSMA的制備方法有效
| 申請號： | 201810984124.6 | 申請日： | 2017-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN109097401B | 公開（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發明（設計）人： | 顧雨春;尹樂 | 申請（專利權）人： | 國健呈諾生物科技（北京）有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392 | 代理人： | 謝建玲;郝亮 |
| 地址： | 102600 北京市大興區經濟技*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 載體 car cd244 antipsma 制備 方法 | ||
1.一種重組載體CAR-CD244-antiPSMA的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1、將特異性抗體編碼基因使用末端帶有BfuAI限制性內切酶識別位點的引物進行PCR擴增；
所述特異性抗體編碼基因序列為序列表序列3；
步驟2、將步驟1的PCR產物進行純化；
步驟3、將步驟2純化的PCR產物在BfuAI限制性內切酶識別位點進行單酶切，并同時將含有改造的CD244骨架的克隆載體在BfuAI限制性內切酶識別位點進行單酶切；
步驟4、將酶切后產物進行純化；
步驟5、將純化后的產物按抗體片段與含有改造的CD244骨架的克隆載體摩爾比為3:1配比后，使用T4連接酶進行連接、轉化、涂板、挑取單克隆提取質粒測序；將在所述改造的CD244骨架的克隆位點區連入antiPSMA，得到的質粒命名為：重組載體CAR-CD244-antiPSMA；
所述改造的CD244骨架序列如序列表序列1所示，其中，序列表序列1中的第1位至第63位所示序列為CD244上膜信號區的DNA序列；序列表序列1中的第64位至第95位所示序列為克隆位點區的DNA序列；序列表序列1中的第96位至第560位所示序列為CD244胞外鉸鏈區、CD244跨膜部分區與CD244胞內部分區的DNA序列；序列表序列1中的第561位至第575位所示序列為DDDDK-tag標記；序列表序列1中的第576位至第578位所示序列為終止密碼子。
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