[發明專利]一種基于納米金信號放大檢測天蠶素B的方法

在審

• 申請號: 201810982718.3
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN109060666A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 蘇秀霞;徐佳;張婧;張海寧;張姣;霍文靜;胡金龍;晏春苗
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: G01N21/17
• 分類號: G01N21/17;G01N21/25;G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

本發明公開了一種基于納米金信號放大檢測天蠶素B的方法，包括以下步驟：1)將上玻片及下玻片浸泡，然后沖洗后吹干；2)將上玻片浸泡，再沖洗后吹干；同時將下玻片浸泡，然后沖洗后吹干；3)將天蠶素B抗體溶液滴加到下玻片表面，并溫育，再沖洗后吹干；4)將待檢測的納米金復合的天蠶素B溶液滴加到下玻片上，再溫育，然后沖洗后吹干；5)將上玻片放置于下玻片上，然后將液晶5CB從該開口處注入到所述凸型空腔內，使得液晶5CB注滿整個凸型空腔，再冷卻至室溫，得液晶池，然后觀察液晶池光學信號的顏色及亮度，以實現對天蠶素B的檢測，該方法能夠實現天蠶素B的檢測，且檢測成本低，檢測靈敏度高，受客觀環境影響較小，且檢測速度快。

技術領域

本發明屬于抗菌肽檢測技術領域，涉及一種基于納米金信號放大檢測天蠶素B的方法。

背景技術

納米金是一類粒徑在1～100nm范圍內的顆粒金，作為一種新型的材料，由于其合成過程簡單、性能穩定、表面積大、與生物分子具有很好的親和性等優點近年來被廣泛應用與生物檢測。Faulk WP等將納米金溶液與兔抗沙門氏菌血清復合，用以檢測沙門氏菌的表面抗原，開創了納米金標記技術。Spielberg等研究以納米金為標記物用于檢測艾滋病病毒抗體的滲濾試驗，確立了納米金免疫滲濾試驗的基本技術。Garcia G等利用納米金作為電化學標記物用以檢測免疫反應。

天蠶素是最早被發現和研究的一種陽離子抗菌肽。天蠶素B對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌均具有很強的殺傷力，而對真菌和真核細胞沒有毒，而在動植物抗病基因工程、植物育種、生物飼料添加劑等領域有著巨大的潛在應用價值。

然而，現有的檢測手段，現有多肽檢測方法有電位滴定法、高效液相色譜法、液晶生物傳感器法等，電位滴定法滴定終點難以判定，且受客觀環境影響大；高效液相色譜法的分析成本高，耗時長。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的缺點，提供了一種基于納米金信號放大檢測天蠶素B的方法，該方法能夠實現天蠶素B的檢測，且檢測成本低，檢測靈敏度高，受客觀環境影響較小，且檢測速度快。

為達到上述目的，本發明所述的基于納米金信號放大檢測天蠶素B的方法包括以下步驟：

1)將玻片切割為上玻片及下玻片，再將上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的溫度下浸泡，然后沖洗后吹干；

2)將上玻片浸入DMOAP水溶液中進行浸泡，再沖洗后吹干；同時將下玻片放置于50℃-70℃的醋酸-醋酸鈉溶液中浸泡，然后沖洗后吹干，其中，醋酸-醋酸鈉溶液中TEA與DMOAP體積比為3:1；

3)將天蠶素B抗體溶液滴加到下玻片表面，并放置在37℃-50℃的溫度下溫育2.5-4h，再沖洗后吹干；

4)將待檢測的納米金復合的天蠶素B溶液滴加到下玻片上，再放置于37℃-50℃的溫度下溫育1.5-3h，然后沖洗后吹干；

5)將上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片與下玻片之間用Mylar聚酯片隔開，Mylar聚酯片的中部開設有凸型空腔，該凸型空腔的一側開口，再將液晶5CB加熱使液晶5CB呈各向同性的液態，然后將液晶5CB從該開口處注入到所述凸型空腔內，使得液晶5CB注滿整個凸型空腔，再冷卻至室溫，得液晶池，然后利用偏光顯微鏡觀察液晶池光學信號的顏色及亮度，以實現對天蠶素B的檢測。

步驟1)中分別通過乙醇及去離子水進行清洗，然后用N₂吹干；

步驟2)中上玻片用超純水進行沖洗，然后用N₂吹干；下玻片用超純水進行沖洗，然后用N₂吹干；

步驟3)中分別用PBS緩沖液及超純水進行沖洗，然后用N₂吹干；

步驟4)中分別用PBS緩沖液及超純水進行沖洗，然后用N₂吹干；