[發(fā)明專利]一種基于低壓柱層析的蛋黃磷脂酰膽堿制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810978721.8
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN108864179A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設計）人: 孫娜;陳晉;林松毅;鮑志杰;李冬梅;沈佳穎
• 申請（專利權）人: 大連工業(yè)大學
• 主分類號: C07F9/10
• 分類號: C07F9/10
• 代理公司: 大連格智知識產(chǎn)權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

本發(fā)明屬于磷脂深加工技術領域，涉及一種基于低壓柱層析的蛋黃磷脂酰膽堿制備方法。將蛋黃粗磷脂溶于氯仿中，以硅膠為固定相，氯仿、甲醇和冰乙酸混合溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，洗脫過程用薄層色譜進行監(jiān)測，收集洗脫有磷脂酰膽堿的組分，旋轉蒸發(fā)濃縮并用氮吹儀干燥，制得純度為90％～98％的蛋黃磷脂酰膽堿。本發(fā)明采用三元混合溶劑梯度洗脫，操作過程簡單，工藝簡單，不需要復雜的設備，成本低廉，生產(chǎn)效率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)，其中有機溶劑可以回收使用，填料通過再生處理重復使用。本發(fā)明制得的蛋黃磷脂酰膽堿，可以用于功能性食品、醫(yī)藥、化妝品等工業(yè)領域。

技術領域

本發(fā)明涉及磷脂深加工技術領域，具體的說，涉及一種基于低壓層析的蛋黃磷脂酰膽堿制備方法。

背景技術

磷脂酰膽堿(PC)，又稱卵磷脂，是磷脂的主要成分。根據(jù)磷酸與甘油連接位置的不同，PC有α和β兩種異構體，天然PC以α為主。作為生物膜的主要組成成分，PC在生物化學和生理學中起著非常關鍵的作用，比如：改善記憶力，減輕壓力，增強嬰兒的腦功能，促進神經(jīng)傳導，緩解焦慮等。磷脂酰膽堿廣泛存在于大豆、蛋黃等生物組織中，鑒于大豆轉基因問題以及大豆蛋白過敏問題，蛋黃可作為一種優(yōu)選的原料，用作磷脂酰膽堿的制備，在蛋黃中磷脂酰膽堿含量占蛋黃磷脂總含量的80％。

到目前為止，磷脂酰膽堿的純化方法有高效液相色譜法、金屬離子沉淀法、超臨界流體萃取法、膜分離法等。由于金屬離子沉淀法會造成重金屬離子殘留的問題；高效液相色譜和超臨界流體萃取法分離效果好，產(chǎn)品質量高，但存在設備成本高，大規(guī)模工業(yè)化應用受限的問題；膜分離法存在膜清洗困難而且處理量小等問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于是公開一種基于低壓柱層析的蛋黃磷脂酰膽堿制備方法：將原料溶于氯仿中，以硅膠為固定相，氯仿、甲醇和冰乙酸混合溶液為洗脫劑，洗脫過程用薄層色譜進行監(jiān)控，收集洗脫有磷脂酰膽堿的組分，旋轉蒸發(fā)濃縮并用氮吹儀干燥，制得純度為90％～98％的蛋黃磷脂酰膽堿。

本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種基于低壓柱層析的蛋黃磷脂酰膽堿制備方法，包括如下步驟：

S1、填料活化：稱取200～300目的混合硅膠粉加熱活化；優(yōu)選方式下，步驟S1所述加熱活化為：50～60℃，4～6h；

S2、裝柱：向步驟S1活化后的硅膠粉中加入氯仿，用玻璃棒攪拌成漿狀，濕法裝入玻璃層析柱中，制得硅膠柱；

優(yōu)選方式下，步驟S2所述的玻璃層析柱的直徑和柱長比為(2～5):25；所述硅膠粉與氯仿的添加量比為3:(6～8)(g/ml)；

S3、上樣：取蛋黃粗磷脂，用氯仿充分溶解，制得樣品溶液；將所述的樣品溶液沿柱壁緩緩加入步驟S2制備的硅膠柱中；

優(yōu)選方式下，步驟S3所述蛋黃粗磷脂的添加量根據(jù)硅膠柱中所使用的硅膠粉用量的不同而改變，蛋黃粗磷脂的添加量為(10～20)mg/g硅膠粉；蛋黃粗磷脂與氯仿的料液比為150～300:1(mg/mL)；所述蛋黃粗磷脂中，磷脂酰膽堿的含量大于60％，磷脂酰乙醇胺的含量大于16％。

S4、梯度洗脫：當步驟S3中所述的樣品溶液流至硅膠面時，立即用為10～20倍柱體積、體積比為18:5:1～17:5:1的氯仿、甲醇、冰醋酸混合溶液進行第一次洗脫；之后用30～50倍柱體積、體積比為16:5:1～10:5:1氯仿、甲醇、冰醋酸的混合溶液進行第二次洗脫，收集第二次洗脫的洗脫液；

S5、薄層色譜檢測：對步驟S4收集到的洗脫液用薄層色譜進行檢測，測定洗脫液中組分是否為目標組分，所述目標組分為：薄層色譜檢測中出現(xiàn)單一斑點，且與磷脂酰膽堿標準品有同一遷移率的組分；

優(yōu)選方式下，步驟S5所述的薄層色譜檢測具體為，每收集0.25倍柱體積洗脫液用薄層色譜檢測一次，用體積比為75:40:8:3的氯仿、甲醇、冰醋酸和水的混合液作為展開劑進行展開。