[發明專利]一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法

有效

• 申請號: 201810978313.2
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN108828049B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 柴建芳;李春燕;馬秀英;王海波;周碩;趙和;呂孟雨;董福雙;劉永偉;楊帆
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院遺傳生理研究所（河北省農林科學院農產品質量安全研究中心）
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 張曉龍

1.一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法，其特征在于，其包括如下步驟：

（1）取單粒小麥種子磨碎或取20 mg面粉置于2 ml離心管中，加1 mL提取液A，渦旋混勻后65℃水浴提取30 min，水浴期間至少再混勻2次；水浴加熱結束后，10000g離心1 min，棄上清，得到第一次沉淀；

（2）所述第一次沉淀按照步驟（1）重復提取1次，得到第二次沉淀；

（3）所述第二次沉淀用0.5 mL的提取液A洗一次，10000g離心5 min，棄上清，得到待分離沉淀；

（4）向所述待分離沉淀中加入100 ul含質量體積比為1%二硫蘇糖醇的提取液B，渦旋混勻后在65℃水浴提取30 min，10000g離心5 min；

（5）取50 ul經過步驟（4）得到的上清液加到50 ul含質量濃度為1.0%-0.6%的4-乙烯基吡啶的樣品緩沖液C中，渦旋混勻后65℃水浴處理15 min，10000g離心5 min，取10 ul上清進行下一步的SDS-PAGE電泳；

（6）采用SDS不連續緩沖系統, 分離膠緩沖液為0.375 mol?L^-1 Tris-HCl，pH8.8，0.1%SDS，分離膠濃度10%，濃縮膠緩沖液為0.125 mol?L^-1 Tris-HCl，pH6.8，0.1% SDS，濃縮膠濃度4.8%，分離膠和濃縮膠交聯度均為2.6%，電極緩沖液為0.025 mol?L^-1 Tris-HCl，pH8.3，0.192 mol?L^-1甘氨酸，0.1% SDS，每孔上樣量10 ul，22℃循環水浴，電流20 mA，電泳5.5 h；

（7）電泳結束后，凝膠在染色液中染色, 在脫色液中脫色至背景清晰；

所述提取液A為體積分數為30%的異丙醇水溶液；

所述提取液B為體積分數為30％異丙醇，0.08 mol?L^-1 Tris-HCl，pH 8.0；

所述樣品緩沖液C為0.08 mol?L^-1 Tris-HCl，pH 8.0，2％SDS，40％甘油和0.02％溴酚藍。

2.根據權利要求1所述的一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法，其特征在于，所述染色液為10％三氯乙酸和0.05%考馬斯亮藍R-250。

3.根據權利要求1所述的一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法，其特征在于，所述脫色液為10％乙醇和8％乙酸。