[發明專利]一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法

有效

• 申請號: 201810978313.2
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN108828049B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 柴建芳;李春燕;馬秀英;王海波;周碩;趙和;呂孟雨;董福雙;劉永偉;楊帆
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院遺傳生理研究所（河北省農林科學院農產品質量安全研究中心）
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 張曉龍

本發明涉及一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS?PAGE分離方法，其包括如下步驟：醇溶蛋白的去除；麥谷蛋白的還原；麥谷蛋白亞基與樣品緩沖液的混合烷化；SDS?PAGE電泳；本發明在保持樣品分離效果的前提下，減少了試劑的用量和樣品制備的步驟，縮短了樣品制備的時間。

技術領域

本發明涉及一種小麥加工品質改良領域中小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法。

背景技術

小麥的麥谷蛋白包括高分子量麥谷蛋白（HMW-GS）和低分子量麥谷蛋白（LMW-GS），它們與醇溶蛋白一起共同構成小麥的面筋蛋白，在面筋網絡中，不同的麥谷蛋白起不同的作用，高分子量麥谷蛋白是面筋網絡的主要成分，是面筋網絡的骨架，低分子量麥谷蛋白與高分子量麥谷蛋白相連形成有細小枝杈的鏈狀結構，麥谷蛋白的組成直接影響小麥面筋的強弱，是影響小麥加工品質的重要參數，而SDS-PAGE是分析小麥麥谷蛋白組成的常用方法。

常規的麥谷蛋白SDS-PAGE分離方法操作較為繁瑣，耗時較長，藥品用量較多。

發明內容

本發明的目的是提供一種方法簡單、分離效果好又節約藥品的小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法。

本發明采用如下技術方案：

一種小麥高低分子量麥谷蛋白亞基SDS-PAGE分離方法，其包括如下步驟：

（1）取單粒小麥種子磨碎或取20 mg面粉置于2 ml離心管中，加1 mL提取液A，渦旋混勻后65℃水浴提取30 min，水浴期間至少再混勻2次；水浴加熱結束后，10000g離心1min，棄上清，得到第一次沉淀；

（2）所述第一次沉淀按照步驟（1）重復提取1次，得到第二次沉淀；

（3）所述第二次沉淀用0.5 mL的提取液A洗一次，10000g離心5 min，棄上清，得到待分離沉淀；

（4）向所述待分離沉淀中加入100 ul含質量體積比為1%二硫蘇糖醇的提取液B，渦旋混勻后在65℃水浴提取30 min，10000g離心5 min；

（5）取50 ul經過步驟（4）得到的上清液加到50 ul含質量濃度為1.0%-0.6%的4-乙烯基吡啶的樣品緩沖液C中，渦旋混勻后65℃水浴處理15 min，10000g離心5 min，取10 ul上清進行下一步的SDS-PAGE電泳；

（6）采用SDS不連續緩沖系統, 分離膠緩沖液為0.375 mol?L-1 Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS，分離膠濃度10%，濃縮膠緩沖液為0.125 mol?L-1 Tris-HCl，pH6.8，0.1% SDS，濃縮膠濃度4.8%，分離膠和濃縮膠交聯度均為2.6%，電極緩沖液為0.025 mol?L-1 Tris-HCl，pH8.3，0.192 mol?L-1甘氨酸，0.1% SDS，每孔上樣量10 ul，22℃循環水浴，電流20 mA，電泳5.5 h；

（7）電泳結束后，凝膠在染色液中染色, 在脫色液中脫色至背景清晰。

分離方法中，所述提取液A為體積分數為30%的異丙醇水溶液。

分離方法中，所述提取液B為體積分數為30％異丙醇，0.08 mol?L-1 Tris-HCl，pH8.0。

分離方法中，所述樣品緩沖液C為0.08 mol?L-1 Tris-HCl，pH 8.0，2％SDS， 40％甘油和0.02％溴酚藍。

分離方法中，所述染色液為10％三氯乙酸，0.05%考馬斯亮藍R-250。

分離方法中，所述脫色液為10％乙醇，8％乙酸。