[發明專利]弱精子癥相關的GRP78基因SNP標志物及其應用

在審

• 申請號: 201810976644.2
• 申請日: 2018-08-25
• 公開（公告）號: CN108866183A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 王俊利;羅小瓊;韋玉霞;韋敬錫;李妹燕;蒙縣宗;廖碧云;陳興鴻;覃海媚;龐曉霞
• 申請（專利權）人: 右江民族醫學院附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開一種弱精子癥相關的GRP78基因SNP標志物及其應用，涉及基因工程和生殖醫學技術領域。本發明采用多重單堿基延伸技術分析GRP78基因多個位點多態性與弱精癥的相關性，得出GRP78基因rs3216733和rs391957 SNP與弱精癥發生存在相關性，可下調其蛋白表達而增加弱精癥發生風險，可作為輔助診斷弱精子癥的試劑或試劑盒。

技術領域

本發明涉及基因工程和生殖醫學技術領域，具體的涉及一種弱精子癥相關的GRP78基因SNP標志物及其應用。

背景技術

不孕不育發病率逐年上升，嚴重影響約10％～15％育齡夫婦，其中男性因素被認為在不孕不育中起著至關重要的作用。導致男性不育病因復雜多樣，其中弱精子癥為重要致病因素之一。弱精子癥是指精子活動力下降而導致男性不育的疾病，表現為前向運動精子小于32％。其發病機制與感染、精液液化異常、內分泌因素、免疫因素、遺傳性因素等相關，但到目前為止尚未完全闡明。近年來，單核苷酸多態性(SNP)與男性不育的相關性研究被許多學者青睞。

葡萄糖調節蛋白78(glucose-regulated protein 78，GRP78)是一個多功能基因，GRP78是熱休克蛋白70家族(heat shock protein， Hsp70)的成員之一，又稱為免疫球蛋白重鏈結合蛋白 (immunoglobulin heavy chain binding protein，Bip)，高度保守的GRP78基因序列具有調節內質網鈣穩態、阻止內質網新生肽聚集、啟動未折疊蛋白反應等作用；葡萄糖調節蛋白78(GRP78)表達水平與精子活力密切相關，其可能機制為GRP78調節精子細胞內鈣離子的水平而影響其活力；GRP78基因SNPs與多種疾病相關，功能性突變或缺失可調節其蛋白表達。有研究報道GRP78蛋白的表達在精子活力正常組和弱精子癥組中存在差異，即在弱精子癥組中GRP78蛋白的表達相對下降，提示GRP78與弱精子癥的發生密切相關，但目前，尚未有GRP78基因多態性與男性不育弱精癥相關性研究報道，同時目前也缺乏具體明顯的標志物來確定其與弱精子癥發病風險的關聯。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明采用多重單堿基延伸技術分析GRP78基因多個位點多態性與弱精癥的相關性，得出GRP78基因rs3216733和rs391957SNP與弱精癥發生存在相關性，可下調其蛋白表達而增加弱精癥發生風險，可作為輔助診斷弱精子癥的試劑或試劑盒。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明是通過以下技術方案實現：

一種弱精子癥相關的GRP78基因SNP標志物，該標志物為：GRP78 基因rs3216733和rs391957SNP。

所述標志物篩選方法為：采用多重單堿基延伸技術分析GRP78 基因多個位點：rs3216733，rs17840761，rs17840762，rs391957位點進行基因分析；

在Primer 3.0引物軟件設計待測SNP位點的所需引物，并合成；

通過對外周血提取的DNA樣本PCR擴增后進行基因分型，包括 PCR產物的純化、堿基延伸PCR及純化、芯片點樣；

統計分析，得出：rs3216733C/D基因型和rs391957C/T基因型顯著增加弱精癥易感性；單體型分析顯示由rs3216733，rs17840761， rs17840762，rs391957構建的單體型C-G-G-T能顯著增加弱精癥發病風險。

所述標志物GRP78基因rs3216733和rs391957SNP與弱精癥發生存在相關性，可下調其蛋白表達而增加弱精癥發生風險。

進一步的，在Primer 3.0引物軟件設計待測SNP位點的所需引物， rs3216733_rs17840761_rs17840762_rs391957四個位點共同正向引物：CCCCTCCGCAATAAACGTCACTG