[發明專利]表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法

在審

• 申請號: 201810973996.2
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN110066768A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 陳晨;卓勤;霍軍生;賈旭東
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心營養與健康所;國家食品安全風險評估中心
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C07K14/735
• 代理公司: 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606
• 代理人: 王賽

本發明公開了一種表達hFcεRIα的RBL?2H3細胞株的構建方法，包括以下步驟：構建含有hFcεRIα基因的重組慢病毒表達載體；將所述重組慢病毒表達載體和慢病毒包裝質粒共轉染到293T細胞得到已包裝的慢病毒；以及用所述已包裝的慢病毒感染RBL?2H3細胞。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法。

背景技術

近年來，變態反應疾病的發病率呈上升的趨勢，對人類健康的危害日益嚴重，發達國家每年有3％-4％的成年人發生食物過敏，兒童及嬰幼兒食物過敏的發生率為5％。另外，隨著轉基因食品的快速發展，轉基因食品的安全性尤其是致敏性成為人們關注的熱點。能夠導致食物過敏的食品有很多種，食品法典食品標簽分委會(CCFL)列出了8種主要的致敏性食品：花生、大豆、奶、雞蛋、魚、貝殼類、小麥和堅果。研究表明，食物過敏涉及各種類型的免疫反應，尤以I型過敏反應，即IgE介導的食物過敏最為常見。肥大細胞、嗜堿性粒細胞等效應細胞表面FcεRI與IgE結合是觸發變態反應的關鍵。

RBL-2H3細胞作為大鼠嗜堿性白血病粒細胞系(rat basophil leukemia，RBL)的一個亞系，與肥大細胞的許多特性和功能類似，常用于過敏反應、免疫反應等方面的研究。RBL-2H3細胞表面表達鼠IgE高親和力受體(FcεRI)，由于種屬特異性，不能與人血清IgE結合，因此使用RBL-2H3細胞研究人IgE與FcεRI作用有局限性。故構建表達人IgE高親和力受體(hFcεRI)的人源化RBL-2H3細胞，是研究食物過敏的重要方法之一。hFcεRI以αβγ2四聚體(α、β和兩個γ亞基組成)或αγ2三聚體(α和兩個γ亞基組成)的形式存在，嚙齒類動物FcεRI只以αβγ2的形式存在。人IgE高親和力受體α亞基(hFcεRIα)是人IgE的結合部位，是觸發過敏反應的關鍵部位，對過敏性疾病的診斷和治療提供重要的信息。因此構建穩定表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株是研究的熱點。

發明內容

基于此，有必要針對由于種屬特異性，RBL-2H3細胞僅能表達鼠IgE高親和力受體的問題，提供一種表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法。

一種表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，包括以下步驟：

構建含有hFcεRIα基因的重組慢病毒表達載體；

將所述重組慢病毒表達載體和慢病毒包裝質粒共轉染到293T細胞得到已包裝的慢病毒；以及

用所述已包裝的慢病毒感染RBL-2H3細胞。

在其中一個實施例中，所述構建含有hFcεRIα基因的重組慢病毒表達載體的步驟包括：

提供所述hFcεRIα基因；

提供原始慢病毒表達載體；以及

將所述hFcεRIα基因與所述原始慢病毒表達載體連接。

在其中一個實施例中，所述原始慢病毒表達載體包括GV367載體。

在其中一個實施例中，所述慢病毒包裝質粒包括pHelper 1.0和pHelper 2.0。

在其中一個實施例中，所述重組慢病毒表達載體：pHelper 1.0：pHelper 2.0的質量比為(3～5)：(2～4)：(2～4)。

在其中一個實施例中，所述重組慢病毒表達載體：pHelper 1.0：pHelper 2.0的質量比為4：3：3。

在其中一個實施例中，所述重組慢病毒表達載體含有綠色熒光蛋白標簽。

在其中一個實施例中，所述提供所述hFcεRIα基因的步驟包括：

提供人cDNA；