[發明專利]表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法在審
| 申請號： | 201810973996.2 | 申請日： | 2018-08-24 |
| 公開（公告）號： | CN110066768A | 公開（公告）日： | 2019-07-30 |
| 發明（設計）人： | 陳晨;卓勤;霍軍生;賈旭東 | 申請（專利權）人： | 中國疾病預防控制中心營養與健康所;國家食品安全風險評估中心 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867;C07K14/735 |
| 代理公司： | 北京華進京聯知識產權代理有限公司 11606 | 代理人： | 王賽 |
| 地址： | 100050*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 構建 重組慢病毒 表達載體 慢病毒包裝質粒 慢病毒感染 細胞 共轉染 慢病毒 細胞株 | ||
1.一種表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，包括以下步驟：
構建含有hFcεRIα基因的重組慢病毒表達載體；
將所述重組慢病毒表達載體和慢病毒包裝質粒共轉染到293T細胞得到已包裝的慢病毒；以及
用所述已包裝的慢病毒感染RBL-2H3細胞。
2.根據權利要求1所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述構建含有hFcεRIα基因的重組慢病毒表達載體的步驟包括：
提供所述hFcεRIα基因；
提供原始慢病毒表達載體；以及
將所述hFcεRIα基因與所述原始慢病毒表達載體連接。
3.根據權利要求2所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述原始慢病毒表達載體包括GV367載體。
4.根據權利要求1所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述慢病毒包裝質粒包括pHelper 1.0和pHelper 2.0。
5.根據權利要求4所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述重組慢病毒表達載體：pHelper 1.0：pHelper 2.0的質量比為(3～5)：(2～4)：(2～4)。
6.根據權利要求5所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述重組慢病毒表達載體：pHelper 1.0：pHelper 2.0的質量比為4：3：3。
7.根據權利要求1所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述重組慢病毒表達載體含有綠色熒光蛋白標簽。
8.根據權利要求2所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，所述提供所述hFcεRIα基因的步驟包括：
提供人cDNA；
提供用于hFcεRIα基因擴增的上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ IDNO.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；以及
以所述人cDNA為模板、所述上游引物和所述下游引物為引物，經過PCR擴增得到所述hFcεRIα基因。
9.根據權利要求1所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，用于感染所述RBL-2H3細胞的所述已包裝的慢病毒的病毒滴度為1×108TU/mL～1×109TU/mL。
10.根據權利要求1所述的表達hFcεRIα的RBL-2H3細胞株的構建方法，其特征在于，被感染的所述RBL-2H3細胞的細胞密度為1×104個/mL～1×105個/mL。
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