[發明專利]一種利用DNA甲基化轉移酶抑制劑提高萊茵衣藻生物量和類胡蘿卜素含量的方法

有效

• 申請號: 201810970732.1
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN110857448B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 姜建國;梁明華;宋德幸;梁志聰
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P23/00
• 分類號: C12P23/00;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

1.DNA甲基化轉移酶抑制劑在提高萊茵衣藻生物量和類胡蘿卜素含量中的應用，其特征在于：

所述的DNA甲基化轉移酶抑制劑為5-氮雜胞苷和5-氮雜-2′-脫氧胞苷中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：

所述的DNA甲基化轉移酶抑制劑的終濃度為100～800μM。

3.一種利用DNA甲基化轉移酶抑制劑提高萊茵衣藻生物量和類胡蘿卜素含量的方法，其特征在于包括如下步驟：

將萊茵衣藻細胞在含有DNA甲基化轉移酶抑制劑的液體培養基中培養一定時間后，每天監測生物量，收集藻細胞，提取色素；

所述的DNA甲基化轉移酶抑制劑為5-氮雜胞苷和5-氮雜-2′-脫氧胞苷中的至少一種。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

所述的DNA甲基化轉移酶抑制劑的終濃度為100～800μM。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

所述的培養的時間為4～20天及以上；

所述的培養的條件為在光照度為500～10000Lx，光暗周期為6～18h：6～18h，溫度為15～30℃，以10～200r/min的轉速震蕩培養。

6.根據權利要求3或5所述的方法，其特征在于：

所述的培養的條件為在光照度為8000Lx，光暗周期為14h：10h，溫度為25℃，以50r/min的轉速震蕩培養。

7.根據權利要求3～5任一項所述的方法，其特征在于：

所述的液體培養基為TAP培養基，其成分為：Tris 2.42g/L，TAP-salts25 mL/L，磷酸鹽溶液1mL/L，微量元素液1mL/L，乙酸1mL/L，調pH至6.95～7.0；

所述的TAP-salts：NH₄Cl 15g/L，MgSO₄·7H₂O 4g/L，CaCl₂·2H₂O 2g/L；

所述的磷酸鹽溶液：K₂HPO₄ 28.2g/100mL，KH₂PO₄ 14.4g/100mL；

所述的微量元素液：Na₂EDTA·2H₂O 5g/100mL，ZnSO₄·7H₂O 2.2g/100mL，H₃BO₃ 1.14g/100mL，MnCl₂·4H₂O 0.5g/100mL，FeSO₄·7H₂O 0.5g/100mL，CoCl₂·6H₂O 0.16g/100mL，CuSO₄·5H₂O 0.16g/100mL，(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 0.11g/100mL。

8.根據權利要求3～5任一項所述的方法，其特征在于：

所述生物量的測定方法為：采用紫外分光光度計測定藻液在750nm波長下的吸光度值，吸光度值越高，則生物量越高；或者，通過測定藻細胞干重來確定生物量的積累情況，離心收集藻細胞后，干燥至恒重后，直接稱重。

9.根據權利要求3～5任一項所述的方法，其特征在于：

所述提取色素的方法為：將培養完成的藻液進行離心，棄上清液，將藻泥與有機溶劑混合，浸提，離心，將上層液進行濾膜過濾；

所述有機溶劑為丙酮、乙醇、甲醇或乙腈；所述浸提的時間為15～30min，所述濾膜為0.45μm濾膜；

測定色素含量的方法為：用分光光度計或酶標儀分別測定665.2nm、652.4nm和470nm波長處的吸光度值，再用下列公式進行計算：

葉綠素a(μg/mL)＝16.72·A_665.2-9.16·A_652.4

葉綠素b(μg/mL)＝34.09·A_652.4-15.28·A_665.2

總類胡蘿卜素(μg/mL)＝(1000·A₄₇₀-1.63·Chla-104.96·Chlb)/221

其中，Chla表示葉綠素a，Chlb表示葉綠素b。