[發明專利]蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法

在審

• 申請號: 201810970144.8
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN109220789A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 段珍珍;李志平;王彥賀;蘭利峰
• 申請（專利權）人: 陜西青美生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 秦月貞

1.一種蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）M9-T337外植體選擇與接種：

取高5-8cm、幼嫩的M9-T337莖尖作為外植體材料；洗去表面的塵土，用洗潔精清洗20min，進而在流水下沖洗2h，最后用無菌水沖洗后置于超凈工作臺，進行消毒，消毒結束后，接種于誘導培養基上，誘導培養基配方為MS+6-BA0.7mg/L+NAA0.1mg/L+2%-3%蔗糖，每瓶接種3個外植體，置于培養室的培養架上誘導培養，20天誘導出芽；

（2）莖尖脫毒：

將步驟（1）誘導的芽在顯微鏡下剝出莖尖，再次消毒，消毒結束后將芽的莖尖轉接到緩沖培養基上，誘導無菌芽，所述緩沖培養基配方為MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.01mg/L+2%-3%蔗糖，培養40天；

（3）叢生芽誘導：

將步驟（2）培養的生長良好、經分子技術檢測無菌、高2-5cm的M9-T337無菌芽轉接到誘導叢生芽的培養基上，所述誘導叢生芽的培養基配方為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+3%蔗糖，放置到培養室培養；

（4）增殖擴繁：

將步驟（3）培養的M9-T337叢生芽分株轉接到增殖培養基上，放置到培養室培養，30天后可再次轉接；

（5）生根培養：

將步驟（4）培養的增殖苗按大小分級后，轉接到無糖培養盒中，前3-5天依靠所述無糖培養盒的容器本身的6個自然透氣孔進行氣體交換，3-5天后人工強制向所述無糖培養盒的容器內通CO₂氣體，25-35天后，可出苗移栽。

2.根據權利要求1所述的蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，步驟（1）中外植體的消毒方法為：在無菌條件下，先將外植體放入75%酒精中，輕輕晃動30s后將其用無菌水沖洗2遍，再用0.1%的升汞溶液消毒8min后用無菌水沖洗5-6遍。

3.根據權利要求1所述的蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，步驟（1）中所述誘導培養條件為：溫度25±1℃，光照強度2000Lx，每天光照12h。

4.根據權利要求1所述的蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，步驟（2）中莖尖的消毒的方法為：先將莖尖用75%的酒精消毒20s，然后用無菌水沖洗2遍，再用2%的次氯酸鈉消毒20min，最后用無菌水沖洗5遍以上。

5.根據權利要求1所述的蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，步驟（4）中所述增殖培養基的初始配方為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+3%蔗糖，隨著繼代次數增多，植物激素含量逐漸降低，所述增殖培養基最終配方為MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+2%蔗糖。

6.根據權利要求1所述的蘋果砧木M9-T337的組培快繁方法，其特征在于，步驟（5）中出苗移栽前練苗1-3天即可。