[發(fā)明專利]一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810965467.8
• 申請(qǐng)日: 2018-08-23
• 公開（公告）號(hào): CN108823266B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 榮紹豐;李理;管世敏;李茜茜;張碩;蔡寶國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海昊海生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/26
• 分類號(hào): C12P19/26;C12N1/14;C12R1/66
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

1.一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法，其特征在于包括如下步驟：

1)一個(gè)菌種活化的步驟：將保藏的菌種于無(wú)菌操作下轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)基中，放置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)5-7天；所述的菌種為赭曲霉(Aspergillus ochraceus)，所述的菌種的保藏號(hào)為CGMCC No.15668；

2)一個(gè)種子培養(yǎng)的步驟：將步驟1)中的斜面菌種于無(wú)菌操作下，刮取黃色孢子并轉(zhuǎn)移至無(wú)菌生理鹽水中，調(diào)整孢子濃度為4.0-7.0×10⁸個(gè)孢子/ml，后按照10％的接種量轉(zhuǎn)接于已經(jīng)滅菌的種子培養(yǎng)基中，于恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：28℃，轉(zhuǎn)速180rpm，培養(yǎng)時(shí)間24h；

3)一個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)的步驟：先在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入過(guò)氧化氫溶液，每升培養(yǎng)基加入0.1-1.5ml的過(guò)氧化氫溶液，并攪拌均勻，后再將步驟2)中獲得的種子培養(yǎng)液無(wú)菌操作下按照10％的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于恒溫?fù)u床或發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)，恒溫?fù)u床培養(yǎng)條件為：24-30℃，轉(zhuǎn)速140-200rpm，培養(yǎng)時(shí)間36-48h；發(fā)酵罐培養(yǎng)條件為：24-30℃，轉(zhuǎn)速100～450rpm，通氣量0.4～1.6v/v/min，培養(yǎng)時(shí)間24-40h；

4)一個(gè)獲取菌體的步驟：將步驟3)中所獲得的發(fā)酵液，用抽濾裝置進(jìn)行抽濾，取濾渣，并用純化水對(duì)濾渣進(jìn)行洗滌，洗至濾液pH中性且無(wú)色為止，獲得濕菌體，再將濕菌體放置于烘箱中50-90℃烘干至恒重，獲得干菌體，對(duì)干菌體進(jìn)行粉碎，獲得平均粒度小于40目的菌體粉末；

5)一個(gè)對(duì)幾丁質(zhì)進(jìn)行分離提取的步驟：

①「一個(gè)酸處理的步驟：將步驟4)中獲得的菌體粉末放置于帶有夾套可控制溫度的反應(yīng)容器中，加入0.1-1.0mol/L的鹽酸溶液進(jìn)行處理，加入后的固液比1:10-1:30，處理溫度4-40℃，間隔4-8h進(jìn)行間歇攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm，處理12-36h，然后抽濾去除酸液，用純化水清洗菌體粉末至pH中性；

②「一個(gè)堿處理的步驟：將前述酸處理后的菌體粉末放置于帶有夾套可控制溫度的反應(yīng)容器中，用含有乙醇和氫氧化鈉的水溶液繼續(xù)處理，在上述的水溶液中，乙醇的質(zhì)量百分比濃度為5％-15％，氫氧化鈉的質(zhì)量百分比濃度為2％-10％，加入后的固液比1:10-1:30，處理溫度4-40℃，間隔4-8h進(jìn)行間歇攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm,處理12-36h，然后抽濾去除堿液，用純化水清洗菌體粉末至pH中性；

③「一個(gè)進(jìn)行干燥的步驟：將上述進(jìn)行酸堿處理后的菌體粉末于烘箱中45-80℃烘干24-48h，得到的白色粉末即為幾丁質(zhì)。

2.如權(quán)利要求1所述的一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法，其特征在于：在步驟1)中所用斜面培養(yǎng)基中，每升培養(yǎng)基中含有200g的去皮馬鈴薯，20g的葡萄糖，20g的瓊脂，pH6.4-6.6；上述的培養(yǎng)基均在121℃，濕熱滅菌30min，冷卻后使用。

3.如權(quán)利要求1所述的一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法，其特征在于：在步驟2)的種子培養(yǎng)基中，每升培養(yǎng)基中含有8g的蔗糖，8g的酵母膏，2.0g的糖蜜，pH6.0；上述的培養(yǎng)基均在121℃，濕熱滅菌30min，冷卻后使用。

4.如權(quán)利要求1所述的一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法，其特征在于：在步驟3)中的發(fā)酵培養(yǎng)基中，每升培養(yǎng)基中含有20-40g的蔗糖，10-30g的酵母膏，3-10g的黃豆粉，0.5-2.0g的糖蜜，1.0-2.0g的K₂HPO₄，1.0-3.0g的MgSO₄·7H₂O，0.005-0.02g的FeSO₄·7H₂O，1.0-2.0g的NaH₂PO₄·12H₂O，pH 5.0-6.0；上述的培養(yǎng)基均在121℃，濕熱滅菌30min，冷卻后使用。

5.如權(quán)利要求1所述的一種采用發(fā)酵的方法制備幾丁質(zhì)的方法，其特征在于：步驟3)中所述過(guò)氧化氫溶液的質(zhì)量百分比濃度為20％。

6.一種菌株，其特征在于，其分類命名為赭曲霉(Aspergillus ochraceus)，保藏號(hào)為CGMCC No.15668。