[發明專利]一種采用發酵的方法制備幾丁質的方法

有效

• 申請號: 201810965467.8
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN108823266B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 榮紹豐;李理;管世敏;李茜茜;張碩;蔡寶國
• 申請（專利權）人: 上海昊海生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12N1/14;C12R1/66
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

本發明提供了一種采用發酵的方法制備幾丁質的方法，以CGMCC No.15668的赭曲霉為菌種，包括一個菌種活化的步驟，一個種子培養的步驟，一個發酵培養的步驟，一個菌體獲取的步驟，一個分離提取幾丁質的步驟。本發明利用赭曲霉發酵產生幾丁質，所用發酵原料無動物來源原料，所以最終獲得的幾丁質產品無熱源污染風險。本發明采用氧化劑對發酵過程進行強化，使最終幾丁質產量從2.79g/L提升至6.3g/L。相比蝦蟹殼提取工藝，本發明中提取幾丁質的工藝，只需采用較低濃度的酸堿即可獲取純度較高的幾丁質產品，有效的降低了生產成本和對環境污染的壓力，具有一定的工業應用前景。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，涉及一種幾丁質的制備方法，具體來說是一種采用發酵的方法制備幾丁質的制備方法。

背景技術

幾丁質又稱甲殼素(Chitin)是一種無毒無味的白色或灰白色半透明的固體，在水、稀酸、稀堿以及一般的有機溶劑中難以溶解，因而限制了它的應用和發展。后來人們在研究探索中發現，幾丁質經濃堿處理脫去其中的乙?；妥兂煽扇苄詭锥≠|，又稱甲殼胺或殼聚糖，它的化學名稱為(1-4)-2-氨基-2-脫氧-β-D-葡萄糖，或簡稱聚胺基葡萄糖。這種殼聚糖由于它的大分子結構中存在大量氨基，從而大大改善了幾丁質的溶解性和化學活性，因此使它在醫療、營養、保健和化妝品等領域具有廣泛的應用價值。

目前生產幾丁質主要有兩個方法：(1)蝦蟹殼提取法。(2)微生物發酵法。而目前商品化的幾丁質的主要來源為蝦蟹殼提取法。但利用蝦蟹殼制備幾丁質存在一些不容忽視的問題：(1)由于生產原料來源受到限制，從不同產地不同批次的蝦蟹殼中提取到的幾丁質產品，具有品質不穩定，差異較大的特點。(2)由于蝦蟹殼中灰分(如鈣質)及蛋白質含量較高，提取幾丁質過程中需要使用大量較高濃度的酸堿來去除灰分和蛋白，這就造成了對大量酸堿廢液的處理壓力。

近些年，利用微生物發酵法生產幾丁質受到廣泛關注。大量的研究主要集中在對高產菌種的選育、發酵工藝的優化及從廢舊菌絲體中提取幾丁質等方面。但根據目前的資料顯示，利用微生物發酵法生產幾丁質能實現工業化的實例較少。原因主要還是由于發酵產量較低，生產成本高，難以實現工業化。

發明內容

針對現有技術中的上述技術問題，本發明提供了一種采用發酵的方法制備幾丁質的制備方法，所述的這種采用發酵的方法制備幾丁質的制備方法要解決現有技術中制備幾丁質的方法產率低、成本高，難以實現工業化的技術問題。

本發明提供了一種采用發酵的方法制備幾丁質的方法，包括如下步驟：

1)一個菌種活化的步驟：將保藏的菌種于無菌操作下轉接于斜面培養基中，放置于恒溫恒濕培養箱中28℃培養5-7天；所述的菌種為赭曲霉(Aspergillus ochraceus)，所述的菌種的保藏號為CGMCC No.15668；

2)一個種子培養的步驟：將步驟1)中的斜面菌種于無菌操作下，刮取黃色孢子并轉移至無菌生理鹽水中，調整孢子濃度為4.0-7.0×10⁸個孢子/ml，后按照10％的接種量轉接于已經滅菌的種子培養基中，于恒溫搖床中進行培養，培養條件為：28℃，轉速180rpm，培養時間24h；

3)一個發酵培養的步驟：先在發酵培養基中加入過氧化氫溶液，每升培養基加入0.1-1.5ml的過氧化氫溶液，并攪拌均勻，后再將步驟2)中獲得的種子培養液無菌操作下按照10％的接種量轉接于發酵培養基中，于恒溫搖床或發酵罐中進行培養，恒溫搖床培養條件為：24-30℃，轉速140-200rpm，培養時間36-48h；發酵罐培養條件為：24-30℃，轉速100～450rpm，通氣量0.4～1.6v/v/min，培養時間24-40h；

4)一個獲取菌體的步驟：將步驟3)中所獲得的發酵液，用抽濾裝置進行抽濾，取濾渣，并用純化水對濾渣進行洗滌，洗至濾液pH中性且無色為止，獲得濕菌體，再將濕菌體放置于烘箱中50-90℃烘干至恒重，獲得干菌體，對干菌體進行粉碎，獲得平均粒度小于40目的菌體粉末；