[發(fā)明專利]一種提取棗樹葉片中的DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810965302.0 | 申請日： | 2018-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN110835627A | 公開（公告）日： | 2020-02-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李春麗 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海律仕醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201508 上海市金山區(qū)金山*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提取 棗樹 葉片 中的 dna 方法 | ||
1.一種提取棗樹葉片中的DNA方法，包括如下步驟：
a)選取新鮮棗樹嫩葉，于冰箱內(nèi)0～4℃下暗處理48h，快速稱取0.1g于液氮中研磨成細(xì)粉，取其快速地轉(zhuǎn)移到1.5mL EP管中，加入65℃預(yù)熱的800μL的第一緩沖液混勻，第一緩沖液包括2.5mM的PEX、濃度為4％(g/mL)的可溶性PVP、100mM pH值為7.5的Tris、10mM pH值為7.5的EDTA、濃度為2％(μL/mL)的β-巰基乙醇、700mM NaCl；
b)65℃恒溫水浴中溫育20min，每5min輕輕顛倒混勻一次；取出后，13000rpm室溫離心5min；
c)取上清，向其中加入等體積的酚、氯仿和異戊醇混合液，其中酚、氯仿、異戊醇的體積比為25∶24∶1，上下顛倒混勻，13000rpm離心5min；
d)取上清，加入等體積的氯仿、異戊醇混合液，其中氯仿、異戊醇混合液中氯仿∶異戊醇的體積比為24∶1，顛倒混勻，13000rpm離心5min；
e)移上清液至一加有700μL預(yù)冷的異丙醇的2mL EP管中，再加入150μL第二緩沖液后輕輕上下顛倒混勻，所述第二緩沖液是3M pH值為5.2的NaAC；13000rpm于4℃離心10min，倒掉上清收集沉淀；
f)將沉淀中加入1mL70％的冷乙醇漂洗，重復(fù)兩次，倒掉乙醇室溫或真空干燥沉淀；
g)加入50μL第三緩沖液，所述第三緩沖液是RTE，其中含有20ug/mL的pH值為8.0的RNase，4℃條件下過夜溶解。
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