[發明專利]用于血液外泌體采集的試管及外泌體分離方法

在審

• 申請號: 201810963224.0
• 申請日: 2018-08-22
• 公開（公告）號: CN109116010A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 王浩然;陸榕;侯杰;王昆鵬
• 申請（專利權）人: 威海紐蘭生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N1/28;B01L3/14
• 代理公司: 威海科星專利事務所 37202
• 代理人: 初姣姣

本發明涉及分子生物學及臨床檢驗技術領域，具體的說是一種無需離心去除樣本中的血細胞，結構合理、操作簡便的用于血液外泌體采集的試管及外泌體分離方法，設有試管主體，其特征在于試管內壁具有采用肝素修飾高分子材料制成的比表面積增大10倍以上的吸附結構，吸附結構設置在試管下部，所述吸附結構為多孔結構或鋸齒陣列或分形陣列吸附結構或類小腸壁結構，本發明與現有技術和設計相比，具有采集方便及時，結構合理、操作簡便等顯著的優點。

技術領域：

本發明涉及分子生物學及臨床檢驗技術領域，具體的說是一種無需離心去除樣本中的血細胞，結構合理、操作簡便的用于血液外泌體采集的試管及外泌體分離方法。

背景技術：

外泌體是直徑為30-150nm的小囊泡，是由活細胞選擇性包裝并釋放。在人體的體液中，如血液、尿液以及腦脊液等，含量豐富。外泌體內含有不同種類的脂質、核酸以及蛋白等，這些物質可以被運輸到特定的靶細胞，從而發揮相應的生物學功能。因此，外泌體在細胞間通訊以及生理和病理過程中發揮著巨大的作用。

目前，血清外泌體最常用的提取方法主要有三種，其一是超高速離心法，其二是，免疫磁珠法，其三是試劑盒法，如美國的Thermo公司以及SBI公司提供的相關的血清外泌體的制備試劑。但三者都有明顯的不足之處，超高速離心法，所獲得的外泌體純度高，但是產率低，耗時長，操作復雜，儀器昂貴不適合醫院檢測實踐，且重復離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質量；免疫磁珠法，能夠特異性的捕捉到相應的外泌體，但是該項技術抗體成本較高，僅為少數國際巨頭公司所掌握，如美國SBI公司等，導致成本高昂；沉降試劑盒法提取外泌體的得率高，但是其純度太低，在獲取外泌體的同時，也會得到許多血清中高豐度的蛋白質。此外，現有外泌體分離技術通常在感染一段時間后采用Western blot來驗證，不能實時監測。

發明內容：

本發明針對現有技術中存在的缺點和不足，提出了一種無需離心處理，結構合理、操作簡便的用于血液外泌體采集的試管及外泌體分離方法。

本發明可以通過以下措施達到：

一種用于血液外泌體采集的試管，設有試管主體，其特征在于試管內壁具有采用肝素修飾高分子材料制成的比表面積增大10倍以上的吸附結構，吸附結構設置在試管下部。

本發明所述吸附結構為多孔結構或鋸齒陣列或分形陣列吸附結構或類小腸壁結構。

本發明試管內還設有便于加速血液血球排放的溝槽結構,所述溝槽結構的設置在吸附結構的上方,溝槽結構中設有兩條以上繞試管內壁設置的溝槽,溝槽沿試管中軸線由吸附結構的頂端延伸至試管口。

本發明所述溝槽結構繞試管內壁均勻設置的6-16個V型溝槽，相鄰的溝槽之間的凸臺表面呈外凸的弧形，便于加速血液或血球排出。

本發明所述試管主體采用肝素修飾高分子材料一體成型，或采用由肝素修飾高分子材料制成的嵌入型結構嵌入普通試管內，所述肝素修飾高分子材料為肝素修飾聚乙烯或肝素修飾聚丙烯或肝素修飾PVC或肝素修飾聚氨酯或肝素修飾PVA。

本發明試管內具有光滑的底面，便于血液排出。

本發明為了持握和處理，在試管口外壁設有環形外凸臺，并在試管口上設有管塞。

本發明所述吸附結構中的類小腸壁結構是指試管內壁上設有比表面積增大10倍以上的環形皺襞，皺襞為褶皺。

本發明所述吸附結構中的鋸齒陣列由高度范圍為0.5-2毫米間隔的錐狀齒，按彼此間距范圍為1-3毫米深的條形溝槽結構排列組成,其中溝槽脊設有額外凸起或凹槽以增加表面積；其中鋸齒陣列由鋸齒單元重復排列形成,所述鋸齒單元自上至下依次設有3-6個長度不同的V型齒,3-6個V型齒的長度自上至下逐漸減小。