[發明專利]用于血液外泌體采集的試管及外泌體分離方法

在審

• 申請號: 201810963224.0
• 申請日: 2018-08-22
• 公開（公告）號: CN109116010A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 王浩然;陸榕;侯杰;王昆鵬
• 申請（專利權）人: 威海紐蘭生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N1/28;B01L3/14
• 代理公司: 威海科星專利事務所 37202
• 代理人: 初姣姣

1.一種用于血液外泌體采集的試管，設有試管主體，其特征在于試管內壁具有采用肝素修飾高分子材料制成的比表面積增大10倍以上的吸附結構，吸附結構設置在試管下部。

2.根據權利要求1所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述吸附結構為多孔結構或鋸齒陣列或分形吸附結構或類小腸壁結構。

3.根據權利要求1所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于試管內還設有便于加速血液血球排放的溝槽結構,所述溝槽結構的設置在吸附結構的上方,溝槽結構中設有兩條以上繞試管內壁設置的溝槽,溝槽沿試管中軸線由吸附結構的頂端延伸至試管口。

4.根據權利要求3所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述溝槽結構繞試管內壁均勻設置的6-16個V型溝槽，相鄰的溝槽之間的凸臺表面呈外凸的弧形，便于加速血液或血球排出。

5.根據權利要求1所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述試管主體采用肝素修飾高分子材料一體成型，或采用由肝素修飾高分子材料制成的嵌入型結構嵌入普通試管內，所述肝素修飾高分子材料為肝素修飾聚乙烯或肝素修飾聚丙烯或肝素修飾PVC或肝素修飾聚氨酯或肝素修飾PVA。

6.根據權利要求1所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于試管內具有光滑的底面。

7.根據權利要求1所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述吸附結構中的類小腸壁結構是指試管內壁上設有比表面積增大10倍以上的環形皺襞。

8.根據權利要求2所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述吸附結構中的鋸齒陣列由高度范圍為0.5-2毫米間隔的錐狀齒，按彼此間距范圍為1-3毫米深的條形溝槽結構排列組成,其中溝槽脊設有額外凸起或凹槽以增加表面積；其中鋸齒陣列由鋸齒單元重復排列形成,所述鋸齒單元自上至下依次設有3-6個長度不同的V型齒,3-6個V型齒的長度自上至下逐漸減小。

9.根據權利要求2所述的一種用于血液外泌體采集的試管，其特征在于所述吸附結構中的多孔結構中孔徑范圍為0.05-0.5mm、孔深度范圍為0.05-0.1mm，孔徑形狀為圓孔或橢圓形孔或方形孔或長條形孔或三角形孔或五邊形孔或六邊形孔。

10.一種利用如權利要求1-9中任意一項所述試管的外泌體分離方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1：取上述試管，將待處理血液加入試管內，加入量為5-10毫升；

步驟2：搖動試管，使試管內樣本與試管內壁上的吸附結構充分接觸；

步驟3：傾倒步驟2處理后的試管內液體，此時樣本中的外泌體囊泡物質附著在試管內壁上的吸附結構上；

步驟4:用磷酸鹽緩沖液仔細多次清洗管壁

步驟5：向步驟4中試管加入適量外泌體裂解和RNA提取試劑trizol,或者加入肝素水解酶或者8摩爾/升氯化鈉溶液解離外泌體進行蛋白分析；

步驟5：通過核酸沉降獲得核酸物質，或者通過抗體結合分析蛋白成分和含量。