[發明專利]一種制備利拉魯肽的方法

有效

• 申請號: 201810959031.8
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN110845600B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 王孝花;馬健
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
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本發明屬于多肽藥物制備方法技術領域，特別涉及一種制備利拉魯肽的方法。包括以下步驟：通過Fmoc固相合成法將Fmoc?Glu?2?R側鏈羧酸連接到氨基類型樹脂A上得Fmoc?Glu(Resin)?R氨基酸樹脂I；再通過多步驟固相偶聯反應合成利拉魯肽肽樹酯，最后在酸性條件下裂解、色譜純化、冷凍干燥得到高純度利拉魯肽。本發明解決了利拉魯肽序列中Gln難耦合的難題，且將Glu側鏈連接到氨基樹脂上，Glu側鏈相對較長，增加了肽鏈與樹脂之間的柔性，使肽鏈更容易變形而降低反應位阻，該方法不需要使用鈀催化體系，避免了鈀金屬的引入，從而提高合成反應效率和利拉魯肽產品質量。

技術領域

本發明屬于醫藥合成領域，具體涉及一種制備利拉魯肽的方法。

背景技術

利拉魯肽，英文名liraglutide，是一種胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物，序列為H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N^α-PA L-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH，分子式：C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，作為一種皮下注射制劑，能起到良好的降低血糖作用，能夠通過降低2型糖尿病患者的空腹及餐后血糖而改善血糖控制，同時能夠降低患者體重。

目前利拉魯肽的合成方法如專利CN103087181、專利CN 102286092、專利CN103145828、文獻J.Med.Chem.2000，43，1664-1669、文獻Chin.J.Org.Chem.2016，36，218-221和文獻Chinese Journal of Pharmaceuticals 2013，44(2)，121-124是利用Fmoc策略固相法依次連接合成利拉魯肽主鏈多肽，然后脫去Lys側鏈保護基，修飾Lys側鏈氨基得到利拉魯肽肽樹脂。該方法依次合成利拉魯肽主鏈時，容易產生與利拉魯肽極性相近的殘缺肽，導致純化困難。再者，此方法在利拉魯肽主鏈合成完畢再修飾Lys側鏈氨基，由于Lys側鏈的高空間位阻，容易導致反應不完全或過反應，產生缺陷肽，總收率較低，同時雜質較多，純化困難。

專利CN102875665、專利CN104045705和專利CN103864918采用固相片段縮合的方法合成，固相片段縮合投入的每個片段都是1.5～3.5倍過量，嚴重浪費肽片段，合成成本很高；同時由于固相片段縮合的樹脂取代值限制，物料通量降低，浪費溶劑，產生大量廢液。

專利CN103275208和專利CN103304659首先合成多肽片段，再按照利拉魯肽的氨基酸序列逐步偶聯剩余氨基酸制得利拉魯肽肽樹脂，修飾Lys側鏈氨基是在利拉魯肽肽樹脂上進行，易導致反應不完全或過反應，產生缺陷肽，總收率較低，同時雜質較多，純化困難，且專利CN103304659合成的多肽片段序列過長，還存在溶解困難、難以耦合的問題。

專利CN104650219采用液相片段縮合的方法合成全保護利拉魯肽主鏈多肽，然后在液相反應體系中經歷四步反應得到全保護利拉魯肽粗品，后處理繁瑣，不利于工業化生產，并且Lys側鏈氨基的修飾在全保護利拉魯肽主鏈多肽上進行，空間位阻大、溶解度低、反應困難，容易產生缺陷肽，造成物料浪費。

專利CN103980358首先通過液相合成片段Fmoc-Lys(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH，然后采用固相合成法逐個耦合氨基酸制備利拉魯肽，無需在利拉魯肽主鏈上修飾Lys側鏈氨基。但該方法偶聯使用的Fmoc-Lys(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH量較大，成本較高，且偶聯反應時肽鏈較長，位阻大，難偶聯；該方法第17位Gln難偶聯，易產生-Gln多肽雜質，單一雜質含量高。