[發明專利]一種快速評價柑橘潰瘍病藥劑藥效的方法

有效

• 申請號: 201810955632.1
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN109022537B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 歐智濤;陳香玲;陳東奎;姜新;趙洪濤;劉要鑫;黃宏明;李果果;鄧鐵軍;黃其椿;王茜;劉福平;汪妮娜;廖惠紅;張蘭
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院園藝研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 南寧市吉昌知識產權代理事務所(普通合伙) 45125
• 代理人: 李秋琦

1.一種快速評價柑橘潰瘍病藥劑藥效的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)接種用器具的準備：用接種針、消毒剪刀、研缽、滅菌濾紙、潰瘍病防治藥劑和普通培養皿做接種用器具，培養皿規格視不同品種柑橘葉片大小而定，清潔消毒后備用；

(2)柑橘潰瘍病葉采集：選取明顯潰瘍病病癥特征的葉片作為菌種來源，葉片發病病癥特點是病灶部位周圍有明顯黃色菌圈，發病中期時病灶中心為木栓化，呈火山口開裂狀；

(3)柑橘健康離體葉片采集：選用葉片為本次梢期所生葉面積已展開至最大，顏色轉綠的新葉，用消毒剪刀剪取與步驟(1)中相應培養皿規格大小近似的葉片作為供試材料；

(4)潰瘍病葉片的處置：將步驟(2)準備的潰瘍病葉片表面進行清洗，采用75％酒精進行簡單消毒，用消毒剪刀將葉片上病斑延菌圈分界處剪下，去掉中間木栓化病灶部，減少雜菌侵入，將剪下的菌圈葉片組織放入研缽，加入5mL無菌水，進行研磨后靜置5min，吸取上清菌液，備用；

(5)離體葉片的處置：打開步驟(1)備好的培養皿皿蓋，將滅菌濾紙平鋪在培養皿底部，取步驟(3)準備的離體葉片，用接種針在離體葉片正面選3個部位進行針刺處理，針頭完全穿過葉片組織，每部位3針，每片葉共9針；

(6)接種病菌：將步驟(1)準備的滅菌濾紙剪成圓或方形小片，吸足菌液后貼在3個針刺點為一組的部位上；

(7)接種后藥劑處置：配制步驟(1)準備的潰瘍病防治藥劑溶液，在接種1h后滴在所接種病菌的濾紙小片上，每紙片1滴，CK滴1滴無菌水；

(8)藥劑后處置：在步驟(7)處理過的葉片上部覆蓋一張滅菌濾紙，在濾紙表面噴灑無菌水保濕，蓋上皿蓋，置于28℃培養箱中培養，在5-10d內觀察發病情況，統計、比較各組處理的發病率；

其中，步驟(4)中剪下的菌圈葉片組織要通過預實驗，將10個菌圈的葉片組織剪下，在3mL無菌水中研磨，所提取接種液可使對潰瘍病敏感的柑橘品種健康葉片的發病率超過70％。

2.根據權利要求1所述的快速評價柑橘潰瘍病藥劑藥效的方法，其特征在于，步驟(6)中圓或方形小片的大小能覆蓋每個穿刺區域的3個針孔。

3.根據權利要求1所述的快速評價柑橘潰瘍病藥劑藥效的方法，其特征在于，步驟(8)中滅菌濾紙的大小與培養皿大小一致。