[發明專利]一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法

在審

• 申請號: 201810955625.1
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN109115907A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 楊輝;侯媛媛;仝秋平;張茜;羅寧;朱萍;梁海秋
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 朱志寬

本發明屬于多糖類物質分子量檢測技術領域，具體涉及的是一種左聚糖(Levan)分子量測定及分離制備的方法。一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法，包括以下步驟：自裝GPC滲透凝膠色譜柱分子量檢測參數優化選擇、分離純化參數優化選擇、酶標法高通量檢測糖含量，糖類物質分子量的測定及分離制備過程。本方法能夠快速方便地分離純化不同分子量的左聚糖，尤其適合左聚糖分子量的快速分析測定以及根據不同分子量進行左聚糖的分離制備。本發明具有成本低、操作方便、準確性高的優點，具有很好的生產應用和研究價值。

技術領域

本發明屬于多糖類物質分子量檢測技術領域，具體涉及的是一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法。

背景技術

多糖的分子量測定是研究多糖性質的一項較為重要的工作，不論在多糖性質的研究，或是在它的用途等方面，都涉及到分子量方面的問題，往往需要測定它的分子量，因而測定分子量成為研究和制備多糖一項經常性的工作。

常見用于多糖物質分子量的測定方法有：滲透壓法、蒸汽滲透計法、端基法、粘度法、光散射法、凝膠色譜法和超過率法等。

其中(GPC)凝膠色譜法又稱為尺寸排阻色譜法，其測定原理是基于體積排阻的分離機理，通過具有分子篩性質的固定相，用來分離不同分子量的物質，并且還可以分析分子體積不同、具有相同化學性質的高分子同系物。此方法中樣品分子與固定相凝膠之間無相互固定作用，完全按照分子篩原理分離。

現在實驗室用的(HPGPC)高效凝膠滲透色譜法，該實驗所用的色譜柱不能自己裝填，均為商品柱。常用的商品柱有μ-Bondagel柱系和TSK柱系。為增加分辨率往往需要將兩個不同分離范圍的色譜柱聯用，這就更加使實驗室所用儀器費用增加。再加之需要高效液相色譜儀和示差檢測器等儀器，整套儀器下來費用較高。

另外一種可以自己裝填柱子的方法，相對(HPGPC)高效凝膠滲透色譜法而言實驗儀器費用有所減少，但所用填料多為進口，例如：Sephacyl、Sephadex等系列填料，但價格均很昂貴。

此外，在自裝柱方法的多糖含量檢測中，苯酚硫酸法較為常用。苯酚硫酸比色法測定多糖的原理是先將多糖在濃硫酸作用下水解成單糖再迅速生成糖醛衍生物進而與苯酚發生顯色反應。多數反應體系為1ml苯酚溶液和5ml苯酚溶液在試管中進行反應，然后用取適量于比色皿中用分光光度計檢測。此方法反應所用試劑有一定的毒性和危險性，在加反應試劑、反應過程中、用完試管后的清洗中試劑對人的毒害作用相對較大。且為達到好的分離效果經常會收集很多管收集，用分光光度計逐一檢測實驗進程較慢，誤差較大。

而對于大多數工廠和小型實驗室而言，并沒有足夠的硬件條件來達到以上兩種檢測方法的要求。因此，尋找一種經濟高效的凝膠柱填料和開發一種安全準確的高通量檢測系統具有很重要的意義。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述問題，提供了一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法。

本發明提供的技術方案如下：

一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法，包括如下步驟：

(1)工作參數及實驗操作：1)色譜柱：采用自裝滲透凝膠柱；2)柱溫：4-25℃；3)流動相；4)流速；5)進樣體積；6)收集范圍：使用自動收集器以1-2min/管進行收集；