[發明專利]一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法

在審

• 申請號: 201810955625.1
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN109115907A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 楊輝;侯媛媛;仝秋平;張茜;羅寧;朱萍;梁海秋
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 朱志寬

1.一種左聚糖分子量測定及分離制備的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)工作參數及實驗操作：1)色譜柱：采用自裝滲透凝膠柱；2)柱溫：4-25℃；3)流動相；4)流速；5)進樣體積；6)收集范圍：使用自動收集器以1-2min/管進行收集；

(2)檢測：以苯酚-硫酸法為基礎手動加樣，酶標儀OD_490nm進行讀數的高通量檢測糖含量方法，步驟如下：取200μl樣品待測液于EP管中→加入100μL6％苯酚溶液后迅速加入500μL濃硫酸溶液→蓋上EP管蓋子，輕輕震蕩搖勻后沸水浴6min→置于冰水浴中變涼，取200μl反應后的溶液于酶標板用酶標儀OD_490nm進行測定；

(3)葡萄糖標準曲線的制定：葡萄糖標準曲線的制定采用步驟(2)中所述方法；

(4)分子量測定操作：以上述步驟(1)中的特征參數為指導進行分子量檢測及分離制備：裝柱→處理樣品→上樣→洗脫→收集→加試劑檢測→處理數據并分析；

(5)分離純化流程：裝柱→處理樣品→上樣→洗脫→收集→冷凍干燥→稱重計算回收率→分子量檢測驗證，若不是單一對稱的峰，則需重復上樣分離。

2.根據權利要求1所述的左聚糖分子量測定及分離制備的方法，其特征在于，步驟(1)中的自裝滲透凝膠柱的填料為高流速6FF瓊脂糖微球，所述自裝滲透凝膠柱其排阻極限范圍為10-4000kDa，所述自裝滲透凝膠柱的柱徑比范圍為1:15-1:20。

3.根據權利要求1所述的左聚糖分子量測定及分離制備的方法，其特征在于，步驟(1)中的流動相為蒸餾水、去離子水、0.1％-2％的Na₂SO₄緩沖液或0.1M的BP緩沖液。

4.根據權利要求1所述的左聚糖分子量測定及分離制備的方法，其特征在于，步驟(1)中的進樣體積為柱體積的1-2％；洗脫流速為0.2-1mL/min。