[發明專利]一種硫酸多粘菌素B的制備方法

有效

• 申請號: 201810952403.4
• 申請日: 2018-08-21
• 公開（公告）號: CN108977482B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 單含文;秦濤;呂稼鋒;斯曉忠;張濤鑄
• 申請（專利權）人: 浙江孚諾醫藥股份有限公司
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12R1/01
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發明提供一種硫酸多粘菌素B的制備方法，其至少包括以下步驟：(1)多粘菌素B種子制備；(2)發酵；(3)精制；其將發酵液中可能影響成品質量的單雜控制到低于1.5％的水平，同時結合有效的精制方法使經該發酵液提取獲得的成品質量符合EP8.0及CP2015的標準。

技術領域

本發明涉及微生物發酵技術領域，具體地，本發明涉及一種硫酸多粘菌素B的制備方法。

背景技術

硫酸多粘菌素B(Polymyxin B sulfate)，又稱硫酸粘桿菌素B，是一種多肽抗生素，幾乎對所有革蘭氏陰性菌均有較強的抑制或殺菌作用，如大腸桿菌、綠膿桿菌、副大腸桿菌、肺炎克雷白桿菌、嗜酸桿菌、百日咳桿菌及痢疾桿菌等,尤其對綠膿桿菌有顯著作用。世界上許多國家己批準該藥作為飼料添加劑使用。硫酸多粘菌素B還作為藥品使用，臨床上主要用于敏感菌引起的感染及綠膿桿菌引起的泌尿系統感染、腦膜炎、敗血癥、燒傷感染以及皮膚粘膜感染等。

硫酸多粘菌素B在國內的生產企業仍然是為數不多的，而且國內還沒有取得該原料藥生產批文的企業，主要還是依賴從國外進口來滿足需求，因此，在我國加快開發生產這種市場前景極好的產品已成為當務之急，多粘菌素類原料藥的開發被列入優先扶持計劃。其中，對于多粘菌素B發酵產物有關物質的控制是一個難點，中國藥典中對于多粘菌素B有關物質的規定，任一單雜不得過3.0％，總雜不得過17.0％，如何有效控制發酵的雜質同時兼顧發酵產量是亟需要解決的問題。

因此，針對上述問題，本發明提供一種硫酸多粘菌素B的制備方法，將發酵液中可能影響成品質量的最大單雜控制到低于1.5％的水平，同時結合有效的精制方法使經該發酵液提取獲得的成品質量符合EP8.0及CP2015的標準。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種硫酸多粘菌素B的制備方法，其至少包括以下步驟：

(1)多粘菌素B種子制備：將產多粘菌素B菌種置于培養基A中進行復蘇培養，然后置于培養基B中進行搖床培養，得到活化的產多粘菌素B菌種；

(2)發酵：將步驟(1)得到的活化的產多粘菌素B菌種加入至培養罐C中，種子罐培養；然后置于培養罐D中，進行發酵罐培養，得到多粘菌素B菌種的發酵液；

(3)精制：對步驟(2)得到的多粘菌素B菌種的發酵液進行過濾、離子交換樹脂處理、大孔樹脂處理、解吸液堿結晶、轉鹽、脫色、納濾濃縮、真空冷凍干燥，得到硫酸多粘菌素B。

在一種實施方式中，所述步驟(1)中所述培養基A中每100ml培養基含有以下組份：蔗糖1-3g、蛋白胨1-5g、磷酸氫二鉀0.1-0.5g、七水硫酸鎂0.2-1g、瓊脂1-3g、余量為水。

在一種實施方式中，所述步驟(1)中所述培養基B中每100ml培養基含有以下組份：小麥粉7-10g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.2-0.6g、碳酸鈣0.1-0.5g、磷酸氫二鈉0.01-0.03g、硫酸銨0.2-0.7g、余量為水。

在一種實施方式中，所述步驟(2)中所述培養罐C中每100ml培養基含有以下組份：小麥粉7-10g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.2-0.6g、碳酸鈣0.1-0.5g、磷酸氫二鈉0.01-0.03g、硫酸銨0.2-0.7g、消泡劑0.01-0.05g、余量為水。

在一種實施方式中，所述步驟(2)中所述培養罐D中每100ml培養基含有以下組份：小麥粉10-15g、淀粉酶0.002-0.01g、酵母粉0.5-1g、碳酸鈣0.1-0.5g、磷酸氫二鈉0.01-0.03g、硫酸銨0.2-0.7g、消泡劑0.01-0.05g、L-蘇氨酸0.01-0.1g、余量為水。

在一種實施方式中，所述步驟(2)中發酵罐培養過程中還包括補料過程，所述補料配方中每100ml培養基含有以下組份：L-蘇氨酸0.01-0.1g、硫酸銨0.1-0.5g、余量為水。