[發明專利]一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基及其應用

有效

• 申請號: 201810949374.6
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN109136170B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 薛淑群;黃金善
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基及其應用，屬于鯉魚細胞培養技術領域。為了解決鯉魚三倍體細胞生長需求的問題，本發明提供了一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基，所述無血清培養基包括DMEM基礎培養基、培養添加劑和抗生素，所述培養添加劑包括重組人胰島素樣生長因子?1、重組人堿性成纖維細胞生長因子、血小板源性生長因子、牛血清白蛋白、牛轉鐵蛋白、纖粘連蛋白、非必需氨基酸和4?羥乙基哌嗪乙磺酸。本發明能減少了細胞污染，簡化提純和鑒定各種細胞產物的程序，適用于鯉魚三倍體細胞的培養。

技術領域

本發明涉及鯉魚細胞培養技術領域，具體涉及一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基及其應用。

背景技術

細胞的生長需要營養環境，用于維持細胞生長的營養基質稱為培養基。體外培養細胞在使用合成培養基時需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，血清所含成分復雜，不同批次血清間的生物活性和因子的不一致，導致產品和實驗結果的重現性差，需要大量驗證工作；血清存在污染外源病毒和致病因子的風險，容易被病毒和支原體感染；含有某些不利于細胞生長的毒性物質或抑制物質，影響細胞生長和細胞某些功能的表達，對某些細胞的體外培養有去分化作用。

市面上出售的培養基的組成成分，建立在對不同細胞系生長的研究之上的。三倍體細胞相對于二倍體細胞，具有細胞體積大、營養需求量大的特點，實驗人員曾用市面上的培養基對三倍體細胞進行培養，會出現細胞生長緩慢、貼壁率低、傳代時間長等問題，不利于三倍體細胞的培養。目前并沒有專門針對鯉魚三倍體體細胞培養的專用培養基，不能完全滿足三倍體體細胞的生長要求，對三倍體體細胞的培養效果總是不很理想。

發明內容

為了解決鯉魚三倍體細胞生長需求的問題，本發明提供了一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基，所述無血清培養基包括DMEM基礎培養基、培養添加劑和抗生素，所述培養添加劑包括重組人胰島素樣生長因子-1、重組人堿性成纖維細胞生長因子、血小板源性生長因子、牛血清白蛋白、牛轉鐵蛋白、纖粘連蛋白、非必需氨基酸和4-羥乙基哌嗪乙磺酸。

進一步地限定，所述無血清培養基由DMEM基礎培養基、培養添加劑和抗生素組成，所述培養添加劑中各成分及含量為：重組人胰島素樣生長因子-1為0.21-0.35μg、重組人堿性成纖維細胞生長因子0.24-0.33μg、血小板源性生長因子0.20-0.27μg、牛血清白蛋白4.71-5.90mg、牛轉鐵蛋白6.30-7.51mg、纖粘連蛋白0.81-1.32mg、非必需氨基酸1.90-2.51mg和4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.303-2.402g，所述含量為各成分在每升無血清培養基中的含量。

優選地，所述培養添加劑中各成分及含量為：重組人胰島素樣生長因子-1為0.30μg、重組人堿性成纖維細胞生長因子0.30μg、血小板源性生長因子0.22μg、牛血清白蛋白5.3mg、牛轉鐵蛋白6.8mg、纖粘連蛋白1.0mg、非必需氨基酸2.2mg和4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.383g，所述含量為各成分在每升無血清培養基中的含量。

進一步地限定，所述抗生素為青霉素和鏈霉素，所述青霉素在每升無血清培養基中的終濃度為100U/mL，所述鏈霉素在每升無血清培養基中的終濃度為100U/mL。

本發明還提供了所述的適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基，在鯉魚三倍體細胞培養中的應用。

所述鯉魚三倍體細胞培養方法如下：

1)原代細胞的培養：采用組織塊貼壁法對三倍體鯉魚細胞進行原代細胞的培養；

2)傳代細胞培養法：長滿單層后進行傳代培養，用胰蛋白酶消化液消化細胞系，棄掉消化液，加入完全培養液，將細胞吹散成單個后繼續培養，細胞貼壁后換液去除死細胞，長滿單層后繼續傳代培養；

3)無血清培養基培養：傳代至鯉魚三倍體細胞性狀穩定，將細胞置于無血清培養基中培養。