[發明專利]一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基及其應用

有效

• 申請號: 201810949374.6
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN109136170B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 薛淑群;黃金善
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基，其特征在于，所述無血清培養基包括DMEM基礎培養基、培養添加劑和抗生素，所述培養添加劑中各成分及含量為：重組人胰島素樣生長因子-1為0.21-0.35μg、重組人堿性成纖維細胞生長因子0.24-0.33μg、血小板源性生長因子0.20-0.27μg、牛血清白蛋白4.71-5.90mg、牛轉鐵蛋白6.30-7.51mg、纖粘連蛋白0.81-1.32mg、非必需氨基酸1.90-2.51mg和4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.303-2.402g，所述含量為各成分在每升無血清培養基中的含量。

2.根據權利要求1所述的適用于鯉魚三倍體細胞生長的無血清培養基，其特征在于，所述培養添加劑中各成分及含量為：重組人胰島素樣生長因子-1為0.30μg、重組人堿性成纖維細胞生長因子0.30μg、血小板源性生長因子0.22μg、牛血清白蛋白5.3mg、牛轉鐵蛋白6.8mg、纖粘連蛋白1.0mg、非必需氨基酸2.2mg和4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.383g，所述含量為各成分在每升無血清培養基中的含量。

3.權利要求1或2所述的無血清培養基在鯉魚三倍體細胞培養中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述鯉魚三倍體細胞培養方法如下：

1)原代細胞的培養：采用組織塊貼壁法對三倍體鯉魚細胞進行原代細胞的培養；

2)傳代細胞培養法：長滿單層后進行傳代培養，用胰蛋白酶消化液消化細胞系，棄掉消化液，加入完全培養液，將細胞吹散成單個后繼續培養，細胞貼壁后換液去除死細胞；長滿單層后繼續傳代培養；

3)無血清培養基培養：傳代至鯉魚三倍體細胞性狀穩定，將細胞置于無血清培養基中培養。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟1)所述組織塊 貼壁法對三倍體鯉魚細胞進行原代細胞的培養是指將三倍體鯉魚尾鰭組織經滅菌后，23℃倒置培養12h，然后加入完全培養液正置培養。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟2)所述胰蛋白酶消化液中胰蛋白酶質量分數為0.25％，消化時間為2min。

7.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟3)中鯉魚三倍體細胞培養是置于細胞板中，每個孔中接種細胞1x10⁵個，加入2.5ml無血清培養基，23℃培養，每天換液。