[發(fā)明專利]腸炎沙門菌cirA基因缺失的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810948687.X | 申請日： | 2018-08-20 |
| 公開（公告）號： | CN108949663B | 公開（公告）日： | 2021-08-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張志強;史秋梅;李永慧;吳同壘;蘇碩青 | 申請（專利權(quán)）人： | 河北科技師范學(xué)院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/90;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 066004 河北省*** | 國省代碼： | 河北;13 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 腸炎 沙門 cira 基因 缺失 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明公開了腸炎沙門菌cirA基因缺失株的構(gòu)建方法，以及腸炎沙門菌cirA基因缺失能夠降低腸炎沙門菌的毒力，且腸炎沙門菌cirA基因缺失能夠應(yīng)用于腸炎沙門菌疫苗。本發(fā)明利用Red同源重組方法構(gòu)建腸炎沙門菌cirA基因缺失株，并對其生物學(xué)特性和毒力進行研究，明確了cirA基因缺失引起腸炎沙門菌毒力下降，為設(shè)計腸炎沙門菌疫苗靶點提供參考，進而防治腸炎沙門菌感染，同時能夠進一步探索腸炎沙門菌CirA蛋白的生理學(xué)功能。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及基因缺失的應(yīng)用，具體地說，涉及一種腸炎沙門菌(C50336)cirA基因缺失的應(yīng)用及cirA基因缺失株的構(gòu)建方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
腸炎沙門菌是一種重要的食源性人獸共患病原菌，給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康造成重大威脅。近年來，隨著肉、蛋、奶的消費水平不斷提高，由食源途徑造成的腸炎沙門菌感染問題日益凸顯。
臨床上，腸炎沙門菌感染可引起幼齡動物的敗血癥和系統(tǒng)感染，但在成年動物中多不表現(xiàn)明顯癥狀，病原在動物機體中長期存在。宿主會利用各種機制避免病原的感染，其中具有殺菌活性的抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs))是機體防御感染的重要成分，抗菌肽能夠限制病原在宿主體內(nèi)的增殖，防止感染的發(fā)生。抗菌肽能夠作用于細菌胞膜表面形成門控通道，造成胞內(nèi)外物質(zhì)的互滲，最終導(dǎo)致細菌的死亡。
細菌感染建立的先決條件在于其能夠在體內(nèi)極端貧瘠的條件下合成必須的營養(yǎng)物質(zhì)，同時還要抵御宿主內(nèi)各種不利因素的殺傷。沙門菌是典型的胞內(nèi)寄生菌，其對宿主造成感染必須耐受宿主施加的酸性環(huán)境、抗菌物質(zhì)、營養(yǎng)貧瘠以及免疫細胞的殺傷。目前在沙門菌的研究中，已經(jīng)相繼發(fā)現(xiàn)了諸多毒力和應(yīng)激相關(guān)蛋白。前期在大腸桿菌的研究中發(fā)現(xiàn)，其外膜表面的大腸菌素受體蛋白CirA是一個多功能蛋白，參與細菌抗應(yīng)激、抗生素耐藥等多種應(yīng)激?；诖?，本發(fā)明利用Red同源重組方法構(gòu)建腸炎沙門菌cirA基因缺失株，并對其生物學(xué)特性和毒力進行研究，明確cirA基因缺失與腸炎沙門菌毒力之間的關(guān)系，探究CirA蛋白對沙門菌致病的影響，為探索腸炎沙門菌疫苗開發(fā)提供工具和基礎(chǔ)是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于明確cirA基因缺失與腸炎沙門菌毒力之間的關(guān)系，以及探究CirA蛋白對沙門菌致病的影響。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
腸炎沙門菌cirA基因缺失用于降低腸炎沙門菌的毒力。
進一步，腸炎沙門菌cirA基因缺失在腸炎沙門菌疫苗中的應(yīng)用。
進一步，腸炎沙門菌cirA基因缺失株的構(gòu)建方法，具體步驟如下：
(1)利用引物P1和P2，經(jīng)PCR擴增，構(gòu)建cirA基因敲除打靶片段；所述引物序列為：
P1：
5’-
P2：
5’-
(2)將質(zhì)粒pKD46轉(zhuǎn)入C50336感受態(tài)細胞，獲得C50336/pKD46陽性菌株，并陽性菌株C50336/pKD46制備成感受態(tài)細胞；
(3)將cirA基因敲除打靶片段電轉(zhuǎn)化進入C50336/pKD46感受態(tài)細胞，獲得陽性重組子C50336cirA::cat；
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