[發(fā)明專利]一種聚(谷氨酸-膽堿磷酸)及其作為疫苗免疫佐劑的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810948438.0
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN109265679B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉宗華;薛巍;李莎;李承花
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學
• 主分類號: C08G69/48
• 分類號: C08G69/48;C08G69/10;A61K39/39
• 代理公司: 廣州市華學知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗;陳燕嫻

1.一種聚（谷氨酸-膽堿磷酸）的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）Co(PMe₃)₄的合成

在氬氣下將無水氯化鈷和鎂粉混合，在真空下加熱活化，得到活化后的混合粉末；然后將四氫呋喃和三甲基膦溶液在-50℃到-100℃溫度范圍慢慢加入到活化后的混合粉末中，時間不低于1小時，然后再保持0.5～2小時；將反應物緩慢升溫至室溫并保持12～48小時；通過真空除去四氫呋喃收集黑褐色粉末，然后用無水正己烷洗滌，在干燥的氬氣下收集Co(PMe₃)₄；

（2）γ-氯丙烷-L-谷氨酸的合成

將L-谷氨酸和3-氯丙醇混合，將該混合物加熱至60～100℃，然后在2小時內(nèi)滴加濃硫酸，并在60～100℃下繼續(xù)攪拌0.5～3小時；真空蒸餾除去過量的3-氯丙醇；將反應混合物冷卻至室溫，然后將三乙胺滴入至該反應混合物中，時間不低于1小時；將粗產(chǎn)物過濾，濾液用乙醚沉淀，并用乙醚洗滌；沉淀物置于30～60℃真空下過夜，獲得γ-氯丙烷-L-谷氨酸；

（3）γ-氯丙烷-L-谷氨酸基-N-羧酸酐的合成

將干燥的THF和三光氣加入到真空干燥后的γ-氯丙烷-L-谷氨酸中，混合物在30～60℃氬氣保護下再攪拌1～5小時；真空除去溶劑收集得到黃色液體；純化粗產(chǎn)物，得到γ-氯丙烷-L-谷氨酸基-N-羧酸酐；

（4）聚（γ-氯丙基-L-谷氨酸）的合成

聚（γ-氯丙基-L-谷氨酸）在無水無氧條件下合成，具體為：將γ-氯丙烷-L-谷氨酸基-N-羧酸酐和無水DMF的混合物在25～50℃下放置2～6小時，然后加入Co(PMe₃)₄后繼續(xù)在25～50℃保持24～96小時；將反應物置于空氣中，聚合停止；將反應混合物在0～8℃下沉淀到甲醇中，過濾后真空干燥；得到聚（γ-氯丙基-L-谷氨酸）；

（5）聚（γ-疊氮基丙基-L-谷氨酸）的合成

將DMF，聚（γ-氯丙基-L-谷氨酸）和疊氮化鈉的混合物在30～80℃攪拌12～60小時；將反應混合物粗濾，然后過中性氧化鋁柱除去鹽；在30～80℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去DMF后得到淺黃色聚合物膜；將膜溶解于二氯甲烷后在甲醇中沉淀，然后過濾；真空干燥后得到聚（γ-疊氮基丙基-L-谷氨酸）；

（6）通過“點擊”化學法合成聚（谷氨酸-膽堿磷酸）

在無氧條件中，將溴化銅、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺、聚（γ-疊氮基丙基-L-谷氨酸）和磷酸膽堿的混合物在20～60℃下攪拌12～60小時，然后將混合物置于空氣中來停止點擊反應；最后，透析，最終獲得聚（谷氨酸-膽堿磷酸）；

所述的透析選用截留分子量2000的透析膜進行透析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚（谷氨酸-膽堿磷酸）的制備方法，其特征在于：

步驟（1）中，

無水氯化鈷、鎂粉、三甲基膦的摩爾比為4.2：12.9：18.1；

無水氯化鈷、四氫呋喃、三甲基膦溶液的比值為4.2 mmo1：10mL：18.1mL；

所述的加熱活化的時間為0.5～2小時；

所述的再保持的時間為0.5小時；

所述的緩慢升溫至室溫并保持的時間為24小時。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚（谷氨酸-膽堿磷酸）的制備方法，其特征在于：

步驟（2）中，

所述的將該混合物加熱至60℃；

所述的繼續(xù)攪拌的條件為在60℃下繼續(xù)攪拌2小時；

所述的真空蒸餾的溫度為30～60℃；

所述的真空下過夜的溫度為40℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚（谷氨酸-膽堿磷酸）的制備方法，其特征在于：

步驟（3）中，

混合物在50℃氬氣保護下再攪拌2小時；

所述的真空干燥的條件為在30～80℃下真空干燥1～5小時；

所述的純化粗產(chǎn)物的條件為用硅膠柱色譜法純化粗產(chǎn)物，流動相為乙酸乙酯/己烷，己烷比例：100%到60%。