[發明專利]一種抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201810948244.0
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN110885797B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 李向東;劉錦;李現道;耿超;田延平;劉茜;郭兆奎;萬秀清;喬嬋;李若
• 申請（專利權）人: 山東農業大學;中國煙草總公司黑龍江省公司牡丹江煙草科學研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N1/21;A01N63/40;A01P1/00;C12R1/94
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

1.一種抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗，其特征在于，弱毒疫苗以TVBMV弱毒突變體為基礎，TVBMV弱毒突變體中嵌入了可誘導對黃瓜花葉病毒產生交叉保護的有效基因片段，所述的有效基因片段包括黃瓜花葉病毒的2b基因；所述的2b基因的核苷酸序列如Seq ID No.19所示；

所述的TVBMV弱毒突變體由pCamTVBMV在HC-Pro 序列中進行四個位點突變獲得，所述的位點突變為：52位的精氨酸突變為谷氨酸，198位的天冬氨酸突變為賴氨酸；第250位的異亮氨酸突變為天冬氨酸，251位的谷氨酰胺突變為谷氨酸。

2.一種如權利要求1所述的抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）構建TVBMV弱毒突變體；

（2）獲得可誘導對黃瓜花葉病毒產生交叉保護的2b基因片段；

（3）將得到的2b基因片段插入TVBMV弱毒突變體，獲得抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，以黃瓜花葉病毒的基因組為模板，利用PCR技術擴增得到2b基因片段，然后插入到TVBMV弱毒突變體的多克隆位點中，獲得含有2b基因片段的弱毒疫苗。

4.一種含有如權利要求1所述的抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗的重組菌。

5.根據權利要求4所述的重組菌，其特征在于，所述的重組菌包括轉入了弱毒疫苗的農桿菌。

6.一種如權利要求1所述的抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗在防治黃瓜花葉病毒強毒株系侵染植物方面的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，通過農桿菌浸潤法將獲得的抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗接種到寄主植物，寄主植物生長正常。

8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，在接種所述的抗黃瓜花葉病毒的弱毒疫苗到寄主植物后第15天接種黃瓜花葉病毒強毒株系，測定交叉保護效果，保護效率達到75％。

9.根據權利要求6所述的應用，其特征為，所述的植物為雙子葉植物。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的植物為煙草。