[發明專利]一種植物病毒弱毒疫苗組合物、弱毒疫苗保存方法及其應用

有效

• 申請號: 201810948204.6
• 申請日: 2018-08-20
• 公開（公告）號: CN110856493B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 劉永中;李向東;姜瀚林;郭兆奎;耿超;田延平;萬秀清;李現道;喬嬋;李若
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司黑龍江省公司牡丹江煙草科學研究所;山東農業大學
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

本發明涉及農業科學領域，公開了一種植物病毒弱毒疫苗組合物、弱毒疫苗保存方法及其應用。植物病毒弱毒疫苗組合物包括攜帶植物病毒弱毒疫苗的發酵菌體、輕質碳酸鈣、黃腐酸和黃原膠。攜帶植物病毒弱毒疫苗的發酵菌體與輕質碳酸鈣的體積比為1:1。黃腐酸和黃原膠的添加量與發酵菌體和輕質碳酸鈣混合物的關系為：每10ml發酵菌體和輕質碳酸鈣混合物中加入50mg黃腐酸和50mg黃原膠。本發明的組合物和方法可以延長弱毒疫苗的保存時間，提高貨架期，有利于弱毒疫苗的廣泛應用，可以大大減少損失。

技術領域

本發明涉及農業科學領域，具體地，本發明涉及一種植物病毒弱毒疫苗組合物、弱毒疫苗保存方法及其應用。

背景技術

病毒病是農業生產中的重要病害之一，嚴重影響作物的產量和品質，造成巨大損失。目前市場上沒有防治作物病毒病的特效藥劑，因而作物病毒病的防治十分困難。交叉保護是防治植物病毒病的有效手段。隨著技術的進步，現在可以構建病毒的侵染性克隆，通過反向遺傳學技術篩選致病力顯著下降、能保護作物免受強毒株系侵染的弱毒疫苗，在作物苗期提前接種，可有效防治病毒病。

植物病毒弱毒疫苗需要利用農桿菌來進行生產，借助農桿菌來接種植物。但農桿菌常溫下存活時間不長，經過一段時間后活菌數會大量下降，因而攜帶植物病毒弱毒疫苗的農桿菌不能長期保存，影響了植物病毒弱毒疫苗的廣泛應用。

有鑒于此特提出本發明。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于克服現有技術的不足，提供一種植物病毒弱毒疫苗組合物、弱毒疫苗保存方法及其應用。本發明通過使用輕質碳酸鈣干燥攜帶弱毒疫苗的農桿菌體，并加入黃腐酸和黃原膠，可延長弱毒疫苗保存時間，提高貨架期，有利于弱毒疫苗的廣泛應用。

為解決上述技術問題，本發明采用技術方案的基本構思是：

本發明的第一目的是提供一種植物病毒弱毒疫苗組合物，植物病毒弱毒疫苗組合物包括攜帶植物病毒弱毒疫苗的發酵菌體、輕質碳酸鈣、黃腐酸和黃原膠。

進一步的方案，攜帶植物病毒弱毒疫苗的發酵菌體與輕質碳酸鈣的體積比為1:1。

進一步的方案，所述的組合物中黃腐酸和黃原膠的質量比為1:1。

進一步的方案，所述的黃腐酸和黃原膠的添加量與發酵菌體和輕質碳酸鈣混合物的關系為：每10ml發酵菌體和輕質碳酸鈣混合物中加入50mg黃腐酸和50mg黃原膠。

本發明通過在攜帶植物病毒弱毒疫苗的農桿菌體中加入黃腐酸和黃原膠，證明能有效延長保存期，進而通過不同濃度梯度的篩選最終確定每10ml輕質碳酸鈣粉劑加入50mg黃腐酸和50mg黃原膠的配方比例保存效果最好，可將植物病毒弱毒疫苗的保存期延長2個月以上。

進一步的方案，所述的植物病毒弱毒疫苗包括抗馬鈴薯X病毒、馬鈴薯Y病毒、黃瓜花葉病毒、煙草花葉病毒中至少一種的弱毒疫苗。

進一步的方案，所述的植物病毒弱毒疫苗包括以TVBMV弱毒突變體為載體，TVBMV弱毒突變體中嵌入了可誘導對馬鈴薯X病毒、和/或馬鈴薯Y病毒、和/或黃瓜花葉病毒、和/或煙草花葉病毒產生交叉保護的有效基因片段；

或者，所述的植物病毒弱毒疫苗包括馬鈴薯X病毒、和/或馬鈴薯Y病毒、和/或黃瓜花葉病毒、和/或煙草花葉病毒突變的弱毒毒株；

優選的，所述的植物病毒弱毒疫苗包括馬鈴薯Y病毒突變弱毒毒株，HC-Pro第182位的K突變為R。

進一步的方案，可誘導對馬鈴薯X病毒產生交叉保護的有效基因片段包括馬鈴薯X病毒的RdRp基因，其核苷酸序列如Seq ID No.13、或Seq ID No.14所示、或Seq ID No.15所示；