[發明專利]一種檢測BRAF基因突變的方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201810939092.8
• 申請日: 2018-08-17
• 公開（公告）號: CN109161594A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 蔣析文;朱小亞;顏爾聰
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海助之鑫知識產權代理有限公司 31328
• 代理人: 陳詳

1.一種用于數字PCR檢測BRAF基因V600突變的通用引物對，其特征在于，所述通用引物對包括通用上游引物F和通用下游引物R；其中，所述通用上游引物F的核苷酸序列如SEQ IDNO.:1所示，所述通用下游引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.:2所示。

2.一種用于數字PCR檢測BRAF基因V600突變的探針組，其特征在于，所述探針組包括選自下組的一種或多種探針：探針T1、探針T2、探針T3、和探針T4；其中，所述探針T1核苷酸序列如SEQ ID NO.:3所示，所述探針T2核苷酸序列如SEQ ID NO.:4所示，所述探針T3核苷酸序列如SEQ ID NO.:5所示，所述探針T4核苷酸序列如SEQ ID NO.:6所示。

3.如權利要求2所述的探針組，其特征在于，所述探針組包括：探針T1、探針T2、探針T3、和探針T4。

4.如權利要求2所述的探針組，其特征在于，所述探針T1的5’端包含有熒光報告基團VIC；和/或，所述探針T1的3’端包含有淬滅基團MGB。

5.如權利要求2所述的探針組，其特征在于，所述探針T2、所述探針T3、或所述探針T4的5’端包含有熒光報告基團FAM；和/或，所述探針T2、所述探針T3、或所述探針T4的3’端包含有淬滅基團MGB。

6.一種用于數字PCR檢測BRAF基因V600突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物對。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括權利要求2所述的探針組。

8.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括引探混合液1、引探混合液2、和引探混合液3；其中，

所述引探混合液1包括：所述通用上游引物F、所述通用下游引物R、所述探針T1、和所述探針T2；

所述引探混合液2包括：所述通用上游引物F、所述通用下游引物R、所述探針T1、和所述探針T3；

所述引探混合液3包括：所述通用上游引物F、所述通用下游引物R、所述探針T1、和所述探針T4。

9.一種用于數字PCR檢測BRAF基因V600突變的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(1)提供待檢測對象的DNA樣本；

(2)制備數字PCR反應體系：

所述數字PCR反應體系包括步驟(1)提供的所述DNA樣本、本發明第一方面所述的引物對、和本發明第二方面所述的探針組；

(3)將步驟(2)獲得的所述數字PCR反應體系制備為數字PCR反應微滴，并進行PCR擴增；

(4)微滴檢測：

PCR擴增結束后，對檢測結果進行分析，并基于泊松分布統計原理計算出靶標分子的拷貝數。

10.權利要求1所述的通用引物對、和/或權利要求2所述的探針組的用途，其特征在于，用于制備數字PCR檢測試劑盒，所述數字PCR檢測試劑盒用于檢測BRAF基因V600突變。