[發明專利]一種干細胞培養基及干細胞分離方法

在審

• 申請號: 201810938952.6
• 申請日: 2018-08-17
• 公開（公告）號: CN109097327A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 劉力偉;劉波
• 申請（專利權）人: 劉力偉
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種干細胞培養基及干細胞分離方法。所述的干細胞培養基包括以下原料：復合維生素、胰島素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫蘇提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、無機鹽、碳酸氫鈉、蛋白多肽。本發明的干細胞培養基通過復合維生素、胰島素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫蘇提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、無機鹽、碳酸氫鈉和蛋白多肽復合而成，不含有動物血清，可避免而引入外源病毒；本發明的干細胞分離方法易操作，分離效果好，50ml組織最終可獲得原代脂肪干細胞6.1×10⁷～6.5×10⁷個，且原代脂肪干細胞活率可達99.1～99.6％。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，具體是一種干細胞培養基及干細胞分離方法。

背景技術

干細胞(stemcell)是一類具有自我復制能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。根據干細胞所處的發育階段分為胚胎干細胞和成體干細胞。根據干細胞的發育潛能分為三類：全能干細胞、多能干細胞和單能干細胞。

目前，脂肪干細胞的分離方法多為膠原酶消化法，導致細胞得率低。而且培養體系多采用含血清培養法，由于血清含有其它動物源成分，使培養體系存在引入外源性病毒的風險，從而使脂肪干細胞在臨床應用中存在很大瓶頸。

發明內容

本發明的目的在于提供一種干細胞培養基及干細胞分離方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種干細胞培養基，包括以下原料：復合維生素、胰島素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫蘇提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、無機鹽、碳酸氫鈉、蛋白多肽。

作為本發明進一步的方案：復合維生素的濃度為2-5g/L、胰島素的濃度為6-15g/L、硫辛酸的濃度為3-7g/L、山茶籽油的濃度為5-15g/L、海藻糖的濃度為13-20g/L、紫蘇提取物的濃度為10-20g/L、牛磺酸的濃度為5-10g/L、右旋糖酐的濃度為12-25g/L、倍他米松的濃度為6-14g/L、無機鹽的濃度為1-2g/L、碳酸氫鈉的濃度為2-6g/L、蛋白多肽的濃度為11-17g/L。

作為本發明進一步的方案：復合維生素的濃度為3g/L、胰島素的濃度為11g/L、硫辛酸的濃度為5g/L、山茶籽油的濃度為10g/L、海藻糖的濃度為16g/L、紫蘇提取物的濃度為13g/L、牛磺酸的濃度為8g/L、右旋糖酐的濃度為22g/L、倍他米松的濃度12g/L、無機鹽的濃度為2g/L、碳酸氫鈉的濃度為4g/L、蛋白多肽的濃度為16g/L。

一種干細胞分離方法，包括以下步驟：

(1)獲取離體組織，所述離體組織為脂肪組織，脂肪組織轉移到無菌采集瓶中，1-5℃保存；所述離體組織與所述干細胞培養基混合前采用生理鹽水清洗1-3遍，洗去血細胞直至加入生理鹽水后脂肪組織懸液澄清無血色；將清洗后的脂肪組織置于100-500r/min轉速下離心8-15min，去除下層液體，吸取上層組織塊放入培養瓶中，將組織塊均勻地鋪在培養瓶中，置于33-37℃、7％CO₂的培養箱中培養，40-55min后組織塊貼于培養面，即得離體組織；

(2)將上述離體組織與所述干細胞培養基混合置于培養瓶中，培養至細胞從所述離體組織中爬出來后刮除離體組織；所述離體組織在所述干細胞培養基培養的第10-15天刮除離體組織；

(3)繼續培養置于33-37℃、7％CO₂的培養箱中培養，待培養基中細胞融合度達80-90％時，消化后傳代培養；所述傳代培養采用干細胞培養基進行傳代培養。

作為本發明進一步的方案：所述生理鹽水含有質量百分比為2％的青霉素和質量百分比為0.5％的葉酸。