[發明專利]一種干細胞培養基及干細胞分離方法

在審

• 申請號: 201810938952.6
• 申請日: 2018-08-17
• 公開（公告）號: CN109097327A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 劉力偉;劉波
• 申請（專利權）人: 劉力偉
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種干細胞培養基，其特征在于，包括以下原料：復合維生素、胰島素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫蘇提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、無機鹽、碳酸氫鈉、蛋白多肽。

2.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，復合維生素的濃度為2-5g/L、胰島素的濃度為6-15g/L、硫辛酸的濃度為3-7g/L、山茶籽油的濃度為5-15g/L、海藻糖的濃度為13-20g/L、紫蘇提取物的濃度為10-20g/L、牛磺酸的濃度為5-10g/L、右旋糖酐的濃度為12-25g/L、倍他米松的濃度為6-14g/L、無機鹽的濃度為1-2g/L、碳酸氫鈉的濃度為2-6g/L、蛋白多肽的濃度為11-17g/L。

3.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，復合維生素的濃度為3g/L、胰島素的濃度為11g/L、硫辛酸的濃度為5g/L、山茶籽油的濃度為10g/L、海藻糖的濃度為16g/L、紫蘇提取物的濃度為13g/L、牛磺酸的濃度為8g/L、右旋糖酐的濃度為22g/L、倍他米松的濃度12g/L、無機鹽的濃度為2g/L、碳酸氫鈉的濃度為4g/L、蛋白多肽的濃度為16g/L。

4.一種根據權利要求1-3任一所述的干細胞分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）獲取離體組織，所述離體組織為脂肪組織，脂肪組織轉移到無菌采集瓶中，1-5℃保存；所述離體組織與所述干細胞培養基混合前采用生理鹽水清洗1-3遍，洗去血細胞直至加入生理鹽水后脂肪組織懸液澄清無血色；將清洗后的脂肪組織置于100-500r/min轉速下離心8-15min，去除下層液體，吸取上層組織塊放入培養瓶中，將組織塊均勻地鋪在培養瓶中，置于33-37℃、7％CO₂的培養箱中培養，40-55min后組織塊貼于培養面，即得離體組織；

（2）將上述離體組織與所述干細胞培養基混合置于培養瓶中，培養至細胞從所述離體組織中爬出來后刮除離體組織；所述離體組織在所述干細胞培養基培養的第10-15天刮除離體組織；

（3）繼續培養置于33-37℃、7％CO₂的培養箱中培養，待培養基中細胞融合度達80-90％時，消化后傳代培養；所述傳代培養采用干細胞培養基進行傳代培養。

5.根據權利要求4所述的干細胞分離方法，其特征在于，所述生理鹽水含有質量百分比為2％的青霉素和質量百分比為0.5％的葉酸。

6.根據權利要求4所述的干細胞分離方法，其特征在于，所述離體組織與所述干細胞培養基混合置于培養瓶中培養直至傳代培養之間，每隔2-3天更換所述干細胞培養基。

7.根據權利要求4所述的干細胞分離方法，其特征在于，所述消化為EDTA-胰酶消化。

8.一種根據權利要求4-7任一所述的干細胞培養基在干細胞培養中的應用。

9.一種根據權利要求4-7任一所述的干細胞分離方法在干細胞培養中的應用。