[發(fā)明專利]鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810938893.2
• 申請(qǐng)日: 2018-08-17
• 公開（公告）號(hào): CN109030614B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 辛文文;康琳;李萍;袁媛;高姍;王景林;夏蘇蘇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;魏少偉

本發(fā)明公開了鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法。本發(fā)明公開的鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法，包括：利用質(zhì)譜方法測(cè)定待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)，得到質(zhì)荷比峰圖，質(zhì)荷比峰圖中含有a1)和a2)的待測(cè)樣本為O4:K8血清型副溶血弧菌或含有O4:K8血清型副溶血弧菌；質(zhì)荷比峰圖中至多含有a1)和a2)中一個(gè)質(zhì)荷比峰的待測(cè)樣本不為O4:K8血清型副溶血弧菌或不含O4:K8血清型副溶血弧菌；a1)(4382?4384)m/z的質(zhì)荷比峰；a2)(4396?4398)m/z的質(zhì)荷比峰。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的方法可用于鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法。

背景技術(shù)

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種重要的食源性致病菌，首次鑒定于1950年日本的胃腸炎暴發(fā)，其廣泛存在于海水，海底沉積物以及海產(chǎn)品中，人們通常由于食用生的或者未煮熟的被副溶血弧菌污染的海產(chǎn)品而引起感染，常見癥狀有胃腸炎，傷口感染和敗血癥，在中國(guó)副溶血弧菌是引起食源性疾病的首要原因之一，在美國(guó)海產(chǎn)品引起腸胃炎中，副溶血弧菌是首要的導(dǎo)致原因。由于副溶血弧菌經(jīng)常會(huì)發(fā)生基因的水平轉(zhuǎn)移，因此其生物型和基因型高度多樣。副溶血弧菌的血清分型主要依據(jù)其菌體抗原(O)和莢膜抗原(K)特性進(jìn)行劃分，至今已發(fā)現(xiàn)至少13個(gè)O血清型和71個(gè)K血清型。1996年2月，O3:K6血清群被認(rèn)為是引起印度腹瀉病例大幅增長(zhǎng)的主要原因，1995年后的O3:K6菌株在基因特性上無法區(qū)分，且在各種分型方法中形成一個(gè)克隆，但是，他們與1995年前O3:K6分離株相比具有獨(dú)特的基因特性，從發(fā)現(xiàn)O3:K6血清型后，后續(xù)發(fā)現(xiàn)的O4:K68，O1:K25和O1:KUT與O3:K6有著相同的基因特性，被認(rèn)為是O3:K6血清變異型，目前已發(fā)現(xiàn)20多個(gè)O3:K6血清變異型，O3:K6及其血清變異型是引起世界范圍暴發(fā)的主要原因。O4:K8血清型是秘魯?shù)貐^(qū)的流行菌株，近年來也在其他一些地區(qū)形成流行態(tài)勢(shì)，特別是在中國(guó)，O4:K8的流行呈現(xiàn)逐年增加的趨勢(shì)，O4:K8有可能在中國(guó)形成較強(qiáng)的流行態(tài)勢(shì)，因此對(duì)O4:K8血清型的監(jiān)測(cè)尤為重要。目前O4:K8血清型的鑒定主要采用血清學(xué)方法和PCR方法。這兩個(gè)方法操作較為復(fù)雜，且耗時(shí)較長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法，所述方法包括：利用質(zhì)譜方法測(cè)定待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)，得到質(zhì)荷比峰圖，根據(jù)所述質(zhì)荷比峰圖確定待測(cè)樣本是否為或是否含有O4:K8血清型副溶血弧菌：所述質(zhì)荷比峰圖中含有a1)和a2)的待測(cè)樣本為或候選為O4:K8血清型副溶血弧菌或含有或候選含有O4:K8血清型副溶血弧菌；所述質(zhì)荷比峰圖中至多含有a1)和a2)中一個(gè)質(zhì)荷比峰的待測(cè)樣本不為或候選不為O4:K8血清型副溶血弧菌或不含或候選不含O4:K8血清型副溶血弧菌；

a1)(4382-4384)m/z的質(zhì)荷比峰；

a2)(4396-4398)m/z的質(zhì)荷比峰。

上述方法中，所述待測(cè)樣本可為副溶血弧菌。

上述方法中，a1)所述質(zhì)荷比峰可為4383m/z的質(zhì)荷比峰。

上述方法中，a2)所述質(zhì)荷比峰可為4397m/z的質(zhì)荷比峰。

上述方法中，所述質(zhì)譜方法可為基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜方法。

上述方法中，所述待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)可按照包括如下步驟的方法制備：

1)將待測(cè)樣本利用乙醇處理，得到乙醇處理物；將所述乙醇處理物進(jìn)行離心，收集沉淀；

2)向所述沉淀中加入甲酸水溶液，得到甲酸處理物；向所述甲酸處理物中加入乙腈，得到乙腈處理物；將所述乙腈處理物進(jìn)行離心，得到的上清液即含有所述待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)。