[發(fā)明專利]鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810938893.2 | 申請(qǐng)日： | 2018-08-17 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109030614B | 公開（公告）日： | 2019-11-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 辛文文;康琳;李萍;袁媛;高姍;王景林;夏蘇蘇 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院 |
| 主分類號(hào)： | G01N27/62 | 分類號(hào)： | G01N27/62 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢;魏少偉 |
| 地址： | 100850*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 副溶血弧菌 血清型 質(zhì)荷比峰 待測(cè)樣本 可用 質(zhì)譜 蛋白質(zhì) | ||
1.鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的方法，包括：利用質(zhì)譜方法測(cè)定待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)，得到質(zhì)荷比峰圖，根據(jù)所述質(zhì)荷比峰圖確定待測(cè)樣本是否為或是否含有O4:K8血清型副溶血弧菌：所述質(zhì)荷比峰圖中含有a1）和a2）的待測(cè)樣本為或候選為O4:K8血清型副溶血弧菌或含有或候選含有O4:K8血清型副溶血弧菌；所述質(zhì)荷比峰圖中至多含有a1）和a2）中一個(gè)質(zhì)荷比峰的待測(cè)樣本不為或候選不為O4:K8血清型副溶血弧菌或不含或候選不含O4:K8血清型副溶血弧菌；
a1）（4382-4384）m/z的質(zhì)荷比峰；
a2）（4396-4398）m/z的質(zhì)荷比峰。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述待測(cè)樣本為副溶血弧菌；
和/或，a1）所述質(zhì)荷比峰為4383 m/z的質(zhì)荷比峰；
和/或，a2）所述質(zhì)荷比峰為4397 m/z的質(zhì)荷比峰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述質(zhì)譜方法為基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜方法。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)按照包括如下步驟的方法制備：
1）將待測(cè)樣本利用乙醇處理，得到乙醇處理物；將所述乙醇處理物進(jìn)行離心，收集沉淀；
2）向所述沉淀中加入甲酸水溶液，得到甲酸處理物；向所述甲酸處理物中加入乙腈，得到乙腈處理物；將所述乙腈處理物進(jìn)行離心，得到的上清液即含有所述待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述甲酸水溶液由水與甲酸組成，所述甲酸水溶液中甲酸與水的體積比為7:3。
6.O4:K8血清型副溶血弧菌的特征質(zhì)荷比峰的建立方法，包括：利用質(zhì)譜方法測(cè)定O4:K8血清型副溶血弧菌與非O4:K8血清型副溶血弧菌的蛋白質(zhì)，分別得到O4:K8血清型副溶血弧菌質(zhì)荷比峰圖與非O4:K8血清型副溶血弧菌質(zhì)荷比峰圖，比較所述O4:K8血清型副溶血弧菌質(zhì)荷比峰圖與所述非O4:K8血清型副溶血弧菌質(zhì)荷比峰圖，所述O4:K8血清型副溶血弧菌質(zhì)荷比峰圖含有而所述非O4:K8血清型副溶血弧菌得質(zhì)荷比峰圖不含的質(zhì)荷比峰即為O4:K8血清型副溶血弧菌的特征質(zhì)荷比峰；
所述O4:K8血清型副溶血弧菌的特征質(zhì)荷比峰為a1）和a2）：
a1）（4382-4384）m/z的質(zhì)荷比峰；
a2）（4396-4398）m/z的質(zhì)荷比峰。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：O4:K8血清型副溶血弧菌與非O4:K8血清型副溶血弧菌的蛋白質(zhì)均按照包括如下步驟的方法制備：
1）將副溶血弧菌利用乙醇處理，得到乙醇處理物，所述副溶血弧菌為O4:K8血清型副溶血弧菌或非O4:K8血清型副溶血弧菌；將所述乙醇處理物進(jìn)行離心，收集沉淀；
2）向所述沉淀中加入甲酸水溶液，得到甲酸處理物；向所述甲酸處理物中加入乙腈，得到乙腈處理物；將所述乙腈處理物進(jìn)行離心，得到的上清液即含有所述待測(cè)樣本的蛋白質(zhì)。
8.鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的模型的建立方法，包括：按照權(quán)利要求6或7所述的方法建立O4:K8血清型副溶血弧菌的特征質(zhì)荷比峰，根據(jù)所述O4:K8血清型副溶血弧菌的特征質(zhì)荷比峰或特征蛋白建立鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的模型；
所述特征質(zhì)荷比峰為質(zhì)譜方法檢測(cè)O4:K8血清型副溶血弧菌蛋白質(zhì)得到的a1）和a2），所述特征蛋白為具有所述特征質(zhì)荷比峰的O4:K8血清型副溶血弧菌蛋白質(zhì)；
a1）（4382-4384）m/z的質(zhì)荷比峰；
a2）（4396-4398）m/z的質(zhì)荷比峰。
9.下述任一應(yīng)用：
X1）權(quán)利要求6-8中任一所述的方法在鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌中的應(yīng)用；
X2）以權(quán)利要求8中所述特征蛋白為標(biāo)志物的鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌中的應(yīng)用；
X3）以權(quán)利要求8中所述特征蛋白為標(biāo)志物的鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌產(chǎn)品中的應(yīng)用；
X4）以權(quán)利要求8中所述特征蛋白為標(biāo)志物的鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌的物質(zhì)在制備診斷或輔助診斷O4:K8血清型副溶血弧菌引發(fā)的胃腸炎、傷口感染或敗血癥產(chǎn)品中的應(yīng)用；
X5）檢測(cè)權(quán)利要求8中所述特征蛋白的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌中的應(yīng)用；
X6）檢測(cè)權(quán)利要求8中所述特征蛋白的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定O4:K8血清型副溶血弧菌產(chǎn)品中的應(yīng)用；
X7）檢測(cè)權(quán)利要求8中所述特征蛋白的物質(zhì)在制備診斷或輔助診斷O4:K8血清型副溶血弧菌引發(fā)的胃腸炎、傷口感染或敗血癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。
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