[發明專利]一種塞內卡谷病毒重組質粒、重組病毒及構建方法有效
| 申請號： | 201810935306.4 | 申請日： | 2018-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN109022374B | 公開（公告）日： | 2021-05-14 |
| 發明（設計）人： | 錢平;李祥敏;劉婷婷;錢蘇紅;陳煥春 | 申請（專利權）人： | 華中農業大學 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 430000 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 塞內卡谷 病毒 重組 質粒 構建 方法 | ||
1.一種塞內卡谷重組病毒，其特征在于，所述塞內卡谷重組病毒為：衣殼VP2的GH環第177位氨基酸由S突變為A的塞內卡谷病毒。
2.一種塞內卡谷病毒重組質粒，其特征在于，所述塞內卡谷病毒重組質粒為負載權利要求1所述塞內卡谷重組病毒全長核苷酸序列的質粒。
3.根據權利要求2所述的重組質粒，其特征在于，用于負載權利要求1所述塞內卡谷重組病毒全長核苷酸序列的質粒包括pBluescript II SK。
4.根據權利要求2或3所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒的全序列如SEQ IDNO.1所示。
5.權利要求2～4任一項所述重組質粒的構建方法，包括以下步驟：
1)擴增SVV HB-CH-2016全長基因組序列；
2)將所述基因組序列克隆至質粒上，在所述基因組序列的5’端融合如SEQ ID NO.2所示的CMV啟動子序列，在所述基因組序列的3’端融合如SEQ ID NO.3所示的丁型肝炎病毒核酶識別序列HDVr-poly序列，得到含塞內卡谷病毒全長基因的質粒；
3)將所述含塞內卡谷病毒全長基因的質粒經DpnI消化、重組環化后，進行轉化以完成定點突變，得到塞內卡谷病毒重組質粒。
6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，步驟1)所述SVV HB-CH-2016全長基因組序列分四段進行擴增。
7.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，步驟3)所述定點突變采用快速定點突變試劑盒進行。
8.權利要求1所述塞內卡谷重組病毒的構建方法，包括以下步驟：
將權利要求2～4任一項所述重組質粒轉染細胞，離心收集上清液，得到塞內卡谷重組病毒。
9.根據權利要求8所述的構建方法，其特征在于，所述細胞包括293T細胞。
10.根據權利要求8所述的構建方法，其特征在于，轉染時所述重組質粒的質量與細胞的個數比為1.0μg∶(0.8～1.5)×106個。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于華中農業大學，未經華中農業大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810935306.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
