[發明專利]一種絲素-短肽凝血微球的制備方法

有效

• 申請號: 201810934442.1
• 申請日: 2018-08-16
• 公開（公告）號: CN109157672B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 楊明英;帥亞俊;錢昱;王玨;王鵬
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61L24/10
• 分類號: A61L24/10;A61L24/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

本發明公開了一種絲素?短肽凝血微球的制備方法。由絲素和短肽復合而成，短肽為RGD、TI或者LD；將蠶繭脫膠后形成的纖維狀絲素溶解獲得絲素蛋白溶液；將絲素蛋白溶液與短肽混勻，注入無水乙醇自組裝再超聲冷凍，取出后使融化為乳白色溶液，經第一次離心后倒去上清液得到絲素蛋白顆粒，再經第二次離心后用去離子水洗滌兩次，兩次離心后超聲第三次離心，棄去底部沉淀從而得到絲素蛋白微球懸浮液，超聲后立刻冷凍；取出冷凍好的懸浮液，冷凍干燥所得絲素短肽微球粉末。本發明獲得的產物具有優良的生物相容性，用途廣泛，同時能配制溶液注射使用以及治療體內臟器出血的凝血和外部創傷的凝血，環保無污染。

技術領域

本發明涉及醫療臨床治療技術領域，具體地說，是一種快速止血材料的制 備方法。

背景技術

出血是創傷后主要并發癥，出血過多必將引起休克，危及生命。因此及時 有效止血對挽救患者生命具有重要意義。有效的止血不但是內外科手術中急需 解決的重要問題，也是戰、創傷中提高傷員生存率的關鍵。出血后如何止血的 問題一直困擾著人類。隨著科學技術的不斷發展，骨蠟等非可吸收性止血材料 已大量應用于臨床，但這些非可吸收性止血材料引起的術區感染和其他并發癥 在所難免，而各種新型醫用敷料不斷出現，性能也越來越優良，但這些新型敷 料或多或少都存在著一些缺陷。近年來醫用可吸收止血材料引起了各國醫學界 和產業界的高度重視，許多大型醫藥公司都致力于研發新型止血材料。發出新 一代的快速止血和功能性止血材料勢在必行，只要這樣才能適應更高的手術要 求，為人類健康提供良好保障。

目前常用的止血材料有可吸收纖維蛋白膠、殼聚糖、可吸收性明膠海綿、 α-氰基丙烯酸酯類組織膠、氧化纖維素和氧化再生纖維素。然而這些生物止血 材料存在著自身的優勢和劣勢，有的止血效果欠佳，有的降解過程中會有毒副 物產生且可能會發生排異反應，有的很難保存或是制作成本太高。更為重要的 是，上述止血材料都是針對人體外部創傷出血所使用的材料，而對體內器官、 組織出血沒有效果。至今為止，尚無一種針對機體內外創傷出血、無毒性、無 抗原性、不影響組織愈合、成本低廉的理想止血材料。因此，研究出一種綜合 性能高的止血材料，成為生物材料領域共同的熱點和之一。

絲素蛋白含有對人體極具營養價值的18種氨基酸，家蠶絲蛋白因其獨特的 力學性能和良好的生物相容性、抗菌性、無過敏性、降解性，以及本質是蛋白 質的結構特點，經處理后可以得到再生絲素蛋白纖維、絲素蛋白粉末、絲素蛋 白膜、絲素多孔材料等，在生物醫學領域有著廣泛的應用。然而至今為止，還 沒有一種絲素蛋白生物材料應用于快速凝血以及機體內部創傷凝血領域。

發明內容

針對傳統止血材料的不足，本發明改進出了一種絲素微球凝血材料，是一 種使用方便、保存簡單、可以抑制體內出血的新型材料。

本發明利用絲素獨特的物理化學性質，與具有凝血功能的短肽復合，制備 一種能模擬血小板高度形變的凝血微球的止血材料，給靜脈出血的大鼠注射5 mg/mL凝血微球溶液后發現小鼠傷口凝血時間明顯縮短，給斷尾小鼠的創口涂 抹適量微球粉末后，出血時間減少，因此該材料可應用于止血領域，能夠作為 一種理想的注射型止血材料。

本發明的具體技術方案如下：

一、一種絲素-短肽凝血微球：所述微球是由絲素和短肽復合而成。

所述的短肽為RGD、TI或者LD，短肽RGD、TI和LD的氨基酸序列分別 為RGD、TRYLRIHPQSQVHQI、LPCDYYGTCLD。

二、一種絲素-短肽凝血微球的制備方法：

(1)將蠶繭脫膠后形成的纖維狀絲素溶解在中性鹽溶液中，經過過濾、透 析、濃縮后獲得0.2％－5％的絲素蛋白溶液；

(2)將步驟(1)中的絲素蛋白溶液與短肽按重量分數比為200：1-9：1 的比例混合均勻，用移液槍注入無水乙醇，使得乙醇終濃度為10％-50％，并混 合均勻待其自組裝一段時間，使用小功率超聲儀超聲1-10min；