[發(fā)明專利]一種血栓彈力圖法定量檢測口服凝血因子Xa抑制劑試劑盒及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810933006.2
• 申請日: 2018-08-16
• 公開（公告）號: CN109082458A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王連升
• 申請（專利權(quán)）人: 上海原科實業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56
• 代理公司: 上海欣創(chuàng)專利商標事務所 31217
• 代理人: 俞鴻

一種血栓彈力圖法定量檢測口服凝血因子Xa抑制劑試劑盒，包括緩沖劑、凝血因子Xa、兔腦凝脂、凝血因子活化劑、支持劑、生物防腐劑；制備方法包括：配制緩沖液、凝血因子Xa儲備液、凝血因子活化劑儲備液、生物防腐液、兔腦凝脂儲備液；取支持劑加入緩沖液配制成支持液；按試劑盒規(guī)格要求將凝血因子Xa、凝血因子活化劑、兔腦凝脂儲備液加到支持液中，混勻后加入生物防腐液、再加入緩沖溶液至規(guī)定量，混勻后分裝凍干。本發(fā)明能通過血栓彈力圖檢測法，方便準確地對樣本中的口服凝血因子Xa抑制劑進行定量檢測，樣本采用全血，無需進行額外處理，對凝血瀑布中的蛋白完整性亦無要求，簡化了檢驗流程，方便了醫(yī)生和患者，極具推廣應用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種血栓彈力圖法定量檢測口服凝血因子Xa抑制劑試劑盒及其制備方法，屬于醫(yī)療器械技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

血栓性疾病是一種常見的心腦血管疾病，是由血栓引起的血管腔狹窄與閉塞，使主要臟器發(fā)生缺血和梗死而引發(fā)機能障礙的各種疾病，在臨床上常表現(xiàn)為心肌梗死、缺血性腦梗死及靜脈血栓栓塞等；目前，臨床上治療血栓性疾病的藥物主要有抗血小板藥物、溶血栓藥和抗凝血藥物三大類；由于傳統(tǒng)的抗凝血藥物在臨床使用中的局限性，新型口服抗凝藥物如凝血因子Xa抑制劑等成為了研究熱點并逐步走向臨床。

凝血因子X(英文為：Coagulation Factor X；簡稱：FX)是一種維生素K依賴的絲氨酸蛋白酶原，其基因位于第13號染色體(13q34)，含8個外顯子和7個內(nèi)含子，8個外顯子分別編碼FX的7個結(jié)構(gòu)功能區(qū)。FX活化為FXa時，重鏈N端Arg52和Ile53之間的肽鍵被切斷，掉下一52氨基酸肽；FⅨa、FⅧa、Ca²⁺和磷脂復合物FⅦa、組織因子、Ca²⁺復合物可激活FX；此外，Russell’s蛇毒(RVV)、鋸鱗蝰蛇毒(SSVV)、腫瘤壞死因子等也可激活FX；FXa是參與血液凝固過程的關(guān)鍵蛋白組分，也是抗血栓藥物的重要靶點，其生理抑制劑主要是抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)和α2-巨球蛋白(α-MG)。

FX活性缺乏或減少見于先天性和獲得性缺乏癥，F(xiàn)X活性增高主要見于高凝狀態(tài)和血栓栓塞性疾病。

Xa因子屬于絲氨酸蛋白酶，其在凝血瀑布反應中有著重要作用，可通過內(nèi)、外源性凝血路徑予以激活，其所處位置的特殊性直接決定自身的重要性。

利伐沙班、阿哌沙班和依度沙班等是口服Xa因子抑制劑，通常為固定劑量，目前尚沒有專門的劑量監(jiān)測試驗；利伐沙班是全球第一個直接Xa因子抑制劑，能高度選擇性地直接抑制呈游離或結(jié)合狀態(tài)的Xa因子，產(chǎn)生抗凝作用，具有生物利用度高、治療疾病譜廣、量效關(guān)系穩(wěn)定、口服方便和出血風險低等特點；作為新型抗凝藥物，利伐沙班通過口服吸收，藥效持久，一天可只服藥一次，其治療窗寬且無需常規(guī)凝血功能監(jiān)測，這些優(yōu)勢使利伐沙班成為抗心腦血管和血液系統(tǒng)疾病的新寵。

但新型抗凝藥物的使用過程中，亦存在著一定的出血風險，尤其在使用劑量較大或在合并肝腎功能嚴重異常的患者身上使用時，出血和凝血功能障礙都是不可忽視的嚴重問題。

因此，口服Xa因子抑制劑類新型抗凝藥物的劑量監(jiān)測已成為亟需解決的問題。

現(xiàn)有技術(shù)中，Xa因子抑制劑常用檢測方法包括：

1)凝血酶原時間(PT)：PT檢測模仿外源性凝血的全部條件，反映外源性凝血是否正常，成人為參考值11～15秒，檢測時，要求整個凝血瀑布中的所有蛋白都是完整的；現(xiàn)有的不同PT試劑對利伐沙班的敏感性差異大，目前臨床上常用的檢測PT方法為比濁凝固法，與利伐沙班血藥濃度的相關(guān)性差；采用Neoplastin Plus法測定PT評估利伐沙班的抗凝作用，該方法使用的檢驗試劑國際敏感度指數(shù)(international sensitivity index，ISI)比較高，與血漿利伐沙班血漿濃度相關(guān)性好，呈劑量依賴性。