[發明專利]利用SSR熒光測序技術鑒定酒花純度的方法

有效

• 申請號: 201810931030.2
• 申請日: 2018-08-15
• 公開（公告）號: CN108977567B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 尹花;董建軍;余俊紅;張志軍;岳杰;陳嶸;賀揚;劉明麗;張磊
• 申請（專利權）人: 青島啤酒股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 李祺;張潔

本發明提出一種利用SSR熒光測序技術鑒定酒花純度的方法，屬于生物技術領域，能夠有效實現酒花混合物中青島大花和麒麟豐綠的品種區分和純度鑒定。該技術方案包括人工制備不同質量比例酒花樣品，提取DNA；選擇兩個品種間的特異性引物進行PCR擴增和毛細管電泳分析；以酒花混合比例為橫坐標，以酒花品種特異性片段峰面積的比值為縱坐標得到線性回歸方程；利用線性回歸方程進行酒花樣品純度計算等步驟。本發明能夠應用于酒花混合物中青島大花和麒麟豐綠的品種區分和純度鑒定，最終實現青島大花的純度鑒定，在源頭上保證集采酒花品種的真實性，從而為規避青島大花中摻入麒麟豐綠提供可靠的鑒定手段。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種利用SSR熒光測序技術鑒定酒花純度的方法。

背景技術

酒花是啤酒的重要原料之一，賦予啤酒特有的苦味和香味，對啤酒的風味、風格，以及啤酒的生物穩定性和非生物穩定性都有著重要影響。傳統的酒花品質分析主要是α-酸、β-酸含量結合感官品評，通過這些指標進行酒花質量的品質控制。國內在酒花品種鑒定上一直停留在感官判定和理化分析階段，但常規指標又無法反映酒花品種及其純度的變化。多年來酒花純度鑒定一直處于質量控制的盲點，是酒花品質控制中亟待解決的課題，特別是青島大花與麒麟豐綠的品種區分，一直是啤酒行業內高度關注的焦點。

酒花顆粒是酒花經干燥、粉碎后制得的混合物，是目前啤酒行業最常用的酒花產品。酒花加工過程中如果用廉價低品質酒花冒充高價酒花，或者在青島大花中摻入a-酸含量較高的酒花品種來滿足啤酒廠的采購標準，不僅給啤酒企業帶來巨大的經濟損失，還會直接影響啤酒的苦味特性和風味特征。

青島大花在我國的種植始于1950年，主要在新疆、甘肅等地種植，目前仍是國內主要的苦花品種。麒麟豐綠1982年從日本引進后開始在新疆、甘肅等地種植，抗霜霉病，成熟期比青島大花提前10天左右，單株座果率和產量均顯著優于青島大花，α-酸高于青島大花，但貯存中α-酸下降很快，容易產生腐臭味，影響啤酒口味，導致麒麟豐綠的用量越來越少。酒花加工過程中，如果在青島大花中混入麒麟豐綠可以顯著提高α-酸含量，更易滿足啤酒企業的采購標準。由于缺乏有效的監控手段，通過常規指標無法識別青島大花中是否含有麒麟豐綠。對啤酒企業而言，青島大花中混入麒麟豐綠不僅給采購帶來巨大的經濟損失，而且直接影響啤酒的風味特征和啤酒口味的一致性，最終影響消費者對啤酒的滿意度和認可度。

現有的研究表明，通過微衛星位點組合可以實現青島大花與麒麟豐綠的品種區分，在酒花球果和酒花顆粒的檢測中可以識別出青島大花和麒麟豐綠的特征峰，但是并無法確定麒麟豐綠混入的具體比例。如果對兩種酒花進行不同比例的混合，通過酒花品種鑒定或許可以推斷酒花的品種，但無法判定混合酒花品種的組成比例。為保證集采酒花品質的一致性，必須對青島大花中混入麒麟豐綠進行純度鑒定，在源頭上保證集采酒花品種的真實性，從而為規避青島大花中摻入麒麟豐綠提供可靠的鑒定手段。

發明內容

本發明提出一種利用SSR熒光測序技術鑒定酒花純度的方法，該方法能夠有效實現酒花混合物中青島大花和麒麟豐綠的品種區分和純度鑒定。

為了達到上述目的，本發明提供了一種利用SSR熒光測序技術鑒定酒花純度的方法，包括以下步驟：

(1)提取青島大花和麒麟豐綠以不同比例制備得到的酒花樣品混合物的DNA；

(2)選取4對SSR引物進行酒花品種鑒定，對提取樣品DNA進行PCR擴增，所述4對引物中的正向引物5'端均用Alexa Fluor 750熒光染料進行標記；

所述4對SSR引物序列如下：

(3)毛細管電泳熒光檢測；

(4)數據分析和標準曲線構建；