[發明專利]一種可定量可追蹤的測定貽貝粘蛋白降解的方法

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• 申請號: 201810925327.8
• 申請日: 2018-08-14
• 公開（公告）號: CN109813911A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 拉斯·赫爾曼;顧銘;母瑞紅
• 申請（專利權）人: 江陰貝瑞森生化技術有限公司;中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/60;G01N33/58
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可定量、可追蹤的測定貽貝粘蛋白降解的方法，包括體內外模型建立及檢測方法。其特征在于，其包括步驟：(1)將貽貝粘蛋白與標記物結合后，通過分子間交聯形成聚合體，或包被在生物醫學材料上固化形成貽貝粘蛋白微球，(2)建立體外和/或體內模型，(3)將貽貝粘蛋白聚合體/微球置于該體外和/或體內模型中，利用體內或/和體外模型，定性和定量測定標記物在上清液中的增加以及在貽貝粘蛋白聚合體/包被微球上的減少量?；厥盏木酆象w/微球可以更加準確的測定貽貝粘蛋白的降解，與上清液的數據相對照，可以獲得更加真實可靠的數據。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的步驟(1)中，所述標記物包括14C、3H氫、125I、131I、35S、32P放射性同位素；熒光染料，如異硫氰酸熒光素、羥基熒光素、四氯熒光素、R101、四乙基羅丹明和羧基四甲基羅丹明、噻唑橙、噁唑橙、二苯乙烯、萘酰亞胺、香豆素類、吖啶類、芘類；綠色熒光蛋白、藻紅蛋白、別藻青蛋白、多甲藻黃素葉綠素蛋白。。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中，其中生物醫學材料為金屬材料，如鈦、鉭、鈮、鋯、不銹鋼、鈷基合金和鈦基合金；無機材料，如陶瓷、玻璃、碳素；可降解或不可降解高分子材料，如聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸酯、芳香聚酯、聚硅氧烷、聚甲醛、膠原、線性脂肪族聚酯、甲殼素、纖維素、聚氨基酸、聚乙烯醇、聚己丙酯，生物醫學復合材料及生物衍生材料。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中,貽貝粘蛋白通過分子間交聯形成的聚合體可以是膠體狀、沉淀物或烘干后制成的粉末、顆粒、薄膜等。聚合方式可以是通過自氧化交聯，也可以通過添加交聯劑方式形成聚合。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中，固化的方式是噴涂、浸泡，貽貝粘蛋白在生物醫學材料上的用量使其均勻覆蓋或浸潤該生物醫學材料，用于固化的溫度優選10-40℃，用于固化的時間范圍為1–24小時。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中建立體外模型包括建立人和動物組織和細胞的體外培養體系，包括原代細胞、傳代細胞和細胞株，具體包括成纖維細胞、心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮細胞，皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道上皮、肝、胰、肺泡上皮，還包括游走型細胞和多形性細胞等；或者建立人和動物的體液和人工體液體系，包括血漿、血清、組織勻漿液、各種酶復合液，并且建立體內模型包括利用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、猴建立模型。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中，在體外模型研究中，結合有貽貝粘蛋白的聚合體/微球是自由狀態均勻散布在體系中；或存在于一個獨立的空間，通過半透膜或濾膜與體系進行物質交換；或包裹在網狀膠囊或透析袋中，然后置入體系中，在體內模型中，聚合體/結合有貽貝粘蛋白的微球直接注射于皮內、皮下、肌肉中；或包裹在網狀膠囊中，置入到腹腔、關節腔和其他腔道中；或保埋在組織中。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(3)中，所涉及的檢測方法包括放射性強度檢測，還包括熒光強度檢測；所檢測的對象包括體外模型中的所取得的液體樣品和固化有貽貝粘蛋白的聚合體/微球，還包括體內模型中的組織樣本、體液樣本及固化有貽貝粘蛋白的聚合體/微球。

9.根據權利要求2所述的方法，其中結合是以共價鍵的形式交聯或是通過分子間物理作用結合。

10.一種用于測定貽貝粘蛋白降解的微球，其特征在于，所述微球包括生物醫學材料和包被固化在所述生物醫學材料上的貽貝粘蛋白，其中所述貽貝粘蛋白是經標記物標記的；所述標記物包括：放射性元素，包括14C、3H氫、125I、131I、35S、32P放射性同位素；熒光染料，如異硫氰酸熒光素、羥基熒光素、四氯熒光素、R101、四乙基羅丹明和羧基四甲基羅丹明、噻唑橙、噁唑橙、二苯乙烯、萘酰亞胺、香豆素類、吖啶類、芘類；綠色熒光蛋白、藻紅蛋白、別藻青蛋白、多甲藻黃素葉綠素蛋白。