[發明專利]一種非病毒載體共表達IL18的CAR-T細胞構建及其應用在審
| 申請號： | 201810922418.6 | 申請日： | 2018-08-14 |
| 公開（公告）號： | CN108949695A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 陳相波;馮煜;雷鳴;田朋飛 | 申請（專利權）人： | 杭州榮澤生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/63;C12N15/62;C07K19/00 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產權代理有限公司 31253 | 代理人： | 馮子玲 |
| 地址： | 311215 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 共表達 殺傷腫瘤細胞 非病毒載體 特異性嵌合 抗原受體 細胞構建 轉座系統 殺傷 磁珠 抗體 質粒 轉染 制備 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種共表達IL18的CD19特異性嵌合抗原受體T細胞的制備方法，通過將含有CD19CAR和IL18的睡美人質粒轉座系統電轉入T細胞中，從而獲得共表達IL18的CD19 CAR-T細胞。
2.根據權利要求1所述的睡美人質粒轉座系統，其特征在于，其系統包含有CD19 CAR和IL的睡美人質粒pT/SVNeo和SB11質粒，其特征在于：
(1)利用Bgl II和Not I酶切位點將CMV-CD19 CAR-IL18構建入pT/SVNeo質粒中形成重組載體pT-CMV-CD19 CAR-IL18；
(2)利用PEIpro陽離子聚合物轉染試劑轉染pT/SVNeo-CMV-CD19 CAR-IL18轉座子及輔助轉座酶SB11，PEIpro與總質粒質量比為4:1，轉座酶SB11與轉座子pT-CMV-CD19 CAR-IL18質量比為1:3；
(3)電轉染后1天至3天內加入濃度為30ng/ml至120ng/ml的IL2和磁珠細胞比例為3:1的anti-CD3/CD28抗體磁珠；
(4)然后，將激活的細胞培養7-10天。
3.根據權利要求1所述的CD19 CAR分子，其特征在于，包括CD19胞外抗原識別區、鉸鏈區、跨膜區、胞內信號區、T2A區和IL18表達區，其核苷酸和氨基酸序列如序列SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
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