[發(fā)明專利]一種完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810922316.4 | 申請日： | 2018-08-14 |
| 公開（公告）號： | CN109001363A | 公開（公告）日： | 2018-12-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鐘進強;田志新 | 申請（專利權(quán)）人： | 同濟大學 |
| 主分類號： | G01N30/89 | 分類號： | G01N30/89 |
| 代理公司： | 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明偉 |
| 地址： | 200092 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 完整蛋白質(zhì) 反相色譜 高通量 預分離 蛋白質(zhì)混合物 洗脫液 反相色譜填料 離心管 注射器 排出 通量 溶解 蛋白 | ||
1.一種完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，加入蛋白質(zhì)混合物于SPE柱，所述蛋白質(zhì)混合物與SPE柱中的反相色譜填料混合，SPE柱中依次加入不同極性的洗脫液，利用注射器將不同極性的洗脫液排出SPE柱得到溶解了不同蛋白的餾分，離心管接收餾分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
(1)將蛋白質(zhì)混合物加入SPE柱中，使蛋白樣品緩慢地經(jīng)過色譜填料而被吸附，SPE柱的下端用離心管承接流出的液體；
(2)在上述步驟(1)處理后的反相色譜填料中加入8種不同極性的流動相，緩慢推注射器依次洗脫，加入的流動相的極性由小到大，SPE柱的下端用離心管承接流出的餾份；
(3)每個餾份用真空濃縮儀進行濃縮干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述步驟(2)的流動相的pH大于8。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述步驟(1)中將SPE柱的下端流出的液體重新加入SPE柱中，重復操作4-6次。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述注射器的出口通過轉(zhuǎn)接頭與SPE柱連接，所述注射器的使用方式：斷開SPE柱和轉(zhuǎn)接頭之間的聯(lián)接，注射器向后拉，在SPE柱加入蛋白混合液或洗脫液后，聯(lián)接SPE柱和轉(zhuǎn)接頭，緩慢地推注射器，使SPE柱中的液體流出。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述不同極性的流動相分別由不同體積的緩沖液A和緩沖液B配制而成，極性由小到大的流動相的乙腈濃度分別為5.0％、20.0％、35％、40％、48％、55％、75％、90％，所述乙腈濃度用體積比表示。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述的緩沖液A為10mM的甲酸銨水溶液；所述的緩沖液B的組成體積比為90％乙腈和10％10mM的甲酸銨水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述SPE柱中放置兩片篩板，所述反相色譜填料裝在兩片篩板中間。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述完整蛋白質(zhì)組高pH反相色譜高通量預分離方法，其特征在于，所述反相色譜填料包括C4反相色譜填料。
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