[發明專利]基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸電化學檢測方法

有效

• 申請號: 201810922017.0
• 申請日: 2018-08-14
• 公開（公告）號: CN108982606B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 李金龍;張永臣;時瑞;滕曉燕;胡琴琴
• 申請（專利權）人: 南京市第二醫院（江蘇省傳染病醫院;南京市公共衛生醫療中心）
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

本發明基于聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)構建了一種肌氨酸電化學檢測方法，實現復雜樣品中肌氨酸的檢測。首先對玻碳電極(GCE)進行預處理，將二甲基甲酰胺(DMF)溶液作為溶劑制備PAA溶液，并進行超聲處理，然后將上述溶液沉積在GCE表面，并在室溫下干燥過夜，隨后將均勻分散的戊二醛溶液滴加到上述GCE表面，并在25℃下干燥2小時以形成膜，最后，將SOX溶液滴在改性的GCE上形成SOX層，用于肌氨酸的檢測。PAA是具有陽離子絡合性質的聚合物，由于其羧基作用，可以作為還原劑來提高該電化學方法的靈敏度，從而實現對肌氨酸的靈敏檢測。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及一種肌氨酸電化學檢測方法，更具體地，涉及一種基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸電化學檢測方法。

背景技術

前列腺癌(PCa)是男性中的常見癌癥，具有遞增的發生率以及高的轉移和復發風險。前列腺癌是指發生在前列腺的上皮性惡性腫瘤。2004年WHO《泌尿系統及男性生殖器官腫瘤病理學和遺傳學》中前列腺癌病理類型上包括腺癌(腺泡腺癌)、導管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細胞癌、腺鱗癌。其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常我們所說的前列腺癌就是指前列腺腺癌。2012年我國腫瘤登記地區前列腺癌發病率為9.92/10萬，列男性惡性腫瘤發病率的第6位。發病年齡在55歲前處于較低水平，55歲后逐漸升高，發病率隨著年齡的增長而增長，高峰年齡是70～80歲。家族遺傳型前列腺癌患者發病年齡稍早，年齡≤55歲的患者占43％。

因此，其早期檢測對于提高存活率是至關重要的。目前，游離前列腺特異性抗原(fPSA)的百分比是診斷PCa患者的唯一診斷指標。然而，由于fPSA的低濃度和短半衰期，它經常導致假陰性測試結果。最近的研究表明，肌氨酸在前列腺癌患者細胞和尿液中均有增高，肌氨酸診斷PCa的準確率高于fPSA。更重要的是，肌氨酸可以容易地在尿中檢測到。這種行為使肌氨酸成為PCa臨床診斷的一種非侵入性檢測。

當前肌氨酸的檢測方法主要包括兩種。一種是肌氨酸的直接測定，其通常包括色譜法和質譜法。上述技術的主要缺點是儀器成本高、操作復雜，這不適合于臨床診斷。另一種是間接定量，其可以通過檢測由肌氨酸氧化酶(SOX)和肌氨酸反應產生的H₂O₂來實現，包括比色法，熒光計和電化學方法。其中，電化學方法由于其操作簡單，靈敏度高，選擇性高等優點，備受關注。

目前已有一些關于肌氨酸的檢測方法專利，如中國專利200910265395.7公開了一種肌氨酸的檢測方法，該方法包括：向毛細管中注入運行緩沖液，并向所述毛細管內注入樣品溶液，在所述毛細管兩端施加電壓，進行毛細管電泳電化學發光檢測。該發明選擇吡啶釕系衍生物作為發光試劑，并優選使用具有高靈敏度和高穩定性的聯吡啶釕，通過簡單的儀器，實現了對肌氨酸高效、快速地檢測，并且此種方法較色譜-質譜聯法相對便宜，但該發明可檢測的樣品溶液僅限被稀釋的肌氨酸溶液，無法實現對復雜樣品中肌氨酸的檢測。

因此，本發明旨在提供一種肌氨酸的電化學檢測方，該法方法可實現對復雜樣品中的肌氨酸進行電化學檢測，并且具有顯著的靈敏度。

發明內容

為解決背景技術中存在的技術問題，本發明提供一種肌氨酸的電化學檢測方法，具體地，是一種基于聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)的肌氨酸電化學檢測方法，以實現對復雜樣品中的肌氨酸進行電化學檢測，并且具有顯著的靈敏度。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

(1)聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)在玻碳電極(GCE)上的固定化

1)將二甲基甲酰胺(DMF)溶液作為溶劑制備聚酰胺酸(PAA)溶液，并將聚酰胺酸(PAA)溶液超聲處理至PAA完全溶解，得超聲處理后的聚酰胺酸(PAA) 溶液；

2)將步驟1)得到的聚酰胺酸(PAA)溶液沉積在玻碳電極(GCE)表面，并在室溫下干燥過夜,得到PAA修飾的玻碳電極(GCE)；