[發(fā)明專利]基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸電化學(xué)檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810922017.0
• 申請日: 2018-08-14
• 公開（公告）號: CN108982606B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李金龍;張永臣;時瑞;滕曉燕;胡琴琴
• 申請（專利權(quán)）人: 南京市第二醫(yī)院（江蘇省傳染病醫(yī)院;南京市公共衛(wèi)生醫(yī)療中心）
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

1.一種基于聚酰胺酸和肌氨酸氧化酶的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)聚酰胺酸(PAA)和肌氨酸氧化酶(SOX)在玻碳電極(GCE)上的固定化

1)將二甲基甲酰胺(DMF)溶液作為溶劑制備聚酰胺酸(PAA)溶液，并將聚酰胺酸(PAA)溶液超聲處理至其完全溶解，得超聲處理后的聚酰胺酸(PAA)溶液；

2)將步驟1)得到的聚酰胺酸(PAA)溶液沉積在玻碳電極(GCE)表面，并在室溫下干燥過夜,得到聚酰胺酸(PAA)修飾的玻碳電極(GCE)；

3)將均勻分散的2.5％戊二醛溶液滴加到步驟2)得到的聚酰胺酸(PAA)修飾的玻碳電極(GCE)表面，并在25℃下干燥2小時以在玻碳電極(GCE)表面形成膜；

4)將濃度為1mg/mL的肌氨酸氧化酶(SOX)溶液滴在步驟3)得到的玻碳電極(GCE)表面，并在4℃下過夜以在玻碳電極(GCE)表面形成肌氨酸氧化酶(SOX)層；

(2)電化學(xué)檢測

用計時電流法在含有不同濃度肌氨酸的0.5M PBS中進(jìn)行，起始電位為-0.4V，滴樣間隔時間為150s，其中，0.5M PBS的pH為7.2；

用電化學(xué)阻抗譜(Electrochemical Impedance Spectroscopy，簡稱EIS)在含有0.1MKCl的5.0mM[Fe(CN)₆]^3-/4-溶液中進(jìn)行電化學(xué)檢測，頻率為10-10⁴Hz。

2.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-1)中制備的聚酰胺酸(PAA)濃度為3-5mg/mL。

3.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-1)中制備的聚酰胺酸(PAA)濃度為4mg/mL。

4.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-1)中超聲處理時間為20-40分鐘。

5.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-1)中超聲處理時間為30分鐘。

6.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-2)中沉積在玻碳電極(GCE)表面的聚酰胺酸(PAA)溶液的體積為3-6μL。

7.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-2)中沉積在玻碳電極(GCE)表面的聚酰胺酸(PAA)溶液的體積為5μL。

8.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-3)中滴加到改性的玻碳電極(GCE)表面的2.5％戊二醛溶液體積為3-6μL。

9.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-3)中滴加到改性的玻碳電極(GCE)表面的2.5％戊二醛溶液體積為5μL。

10.如權(quán)利要求1所述的肌氨酸電化學(xué)檢測方法，其中，所述的步驟(1)-4)中滴加到玻碳電極(GCE)表面上的肌氨酸氧化酶(SOX)溶液體積為3-6μL。