[發(fā)明專利]外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的記憶性免疫細(xì)胞及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810919520.0
• 申請(qǐng)日: 2018-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN109082410A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 路春光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 路春光
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/12;A61P31/18;A61P31/06
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1.一種外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于將新鮮分離的或者經(jīng)過凍存后復(fù)蘇的外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過篩選和二次陽性分選出記憶性免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)后即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于誘導(dǎo)分化操作如下：

（1）記憶性免疫細(xì)胞分離后重懸，加入300-2000u/mLIFN-γ、抗人50-200ng/mL CD3單克隆抗體、50-200ng/mL CD28單克隆抗體及500-2000u/mL重組人IL-2和50-200u/mLIL-1α完成初次刺激；

（2）每2天半量換液，補(bǔ)加500-2000u/mL重組人IL-2、500-1000 u/mL IL-7 和500-1000u/mL重組人IL-15，培養(yǎng)時(shí)間為12-20天。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于誘導(dǎo)后使用重組TCR逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于步驟（1）中將記憶性免疫細(xì)胞用X-VIVO15重懸。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于步驟（1）中重懸的濃度為(0.4-1.2)×10⁶/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于步驟（1）中外周血TCM細(xì)胞重懸后，加入500-1000u/mLIFN-γ、抗人90-200ng/mL CD3單克隆抗體、90-200ng/mL CD28單克隆抗體及500-1000u/mL重組人IL-2和90-200u/mLIL-1α完成初次刺激。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于步驟（2）中補(bǔ)加500-1000u/mL重組人IL-2、500-1000 u/mL IL-7 和500-1000 u/mL重組人IL-15。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的記憶性免疫細(xì)胞，其特征在于

（1）外周血單個(gè)核細(xì)胞重懸后，以1000IU/ml IFN-γ、抗人130ng/ml CD3單克隆抗體、抗人110ng/ml CD28單克隆抗體及重組人1000IU/ml IL-2、120u/mLIL-1α完成初次刺激；

（2）每2天半量換液，補(bǔ)加1000IU/ml重組人IL-2 、800 u/mL IL-7和800 u/mLIL-15。

9.一種權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的記憶性免疫細(xì)胞在臨床腫瘤治療和病毒感染性疾病藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤包括但不限于腎癌、惡性黑色素瘤、肺癌、肝癌、大腸癌、胃癌或淋巴瘤和病毒感染性疾病包括但不限病毒性肝炎、結(jié)核病和艾滋病等。