[發(fā)明專利]一種通用供體干細胞及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810918727.6
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN110819592A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設計）人: 張進
• 申請（專利權）人: 賽元生物科技(杭州)有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/87
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所(普通合伙) 43205
• 代理人: 許伯嚴

本發(fā)明公開了通用供體干細胞及其制備方法。本發(fā)明公開的通用供體干細胞可用于克服基于細胞的移植療法中的免疫排斥，具體地，本發(fā)明公開的通用供體干細胞不表達MHC?I和MHC?II（或HLA?I和HLA?II），從而使得干細胞具有低免疫原性。

技術領域

本發(fā)明涉及一種干細胞領域，具體地涉及一種通用供體干細胞及其制備方法。

背景技術

多能干細胞具有巨大的治療潛力。這些未分化的細胞可以產(chǎn)生幾乎任何特化的細胞類型，作為受損組織的天然修復系統(tǒng)，或作為可進一步設計用于治療疾病的新型治療劑?？茖W家利用干細胞的獨特性質來治療與死亡或受損細胞相關的疾病。目前，在歐洲，每年有26000名患者接受干細胞治療來治療血液疾病和一些癌癥，包括白血病。然而，目前人類供體是干細胞的主要來源，由于患者免疫系統(tǒng)的排斥而限制了治療的成功。目前，干細胞生物學的最新進展使人們有可能考慮將患者自身細胞用作移植的無限源。不幸的是，就多能性、表觀遺傳狀態(tài)、分化能力和基因組穩(wěn)定性而言，iPSC的產(chǎn)生仍然是昂貴的，耗時且高度可變的過程。此外，發(fā)現(xiàn)在重編程和長時間培養(yǎng)期間發(fā)生的變化引發(fā)適應性免疫應答，導致甚至自體干細胞衍生的移植物的免疫排斥。

目前已有一些重要的證據(jù)支持了HLA-工程細胞將正常運作并避免移植后的異體排斥。

(1)HLA I類陰性或HLA II類陰性的罕見個體相對健康，表明HLA陰性細胞可分化成所有必需器官。

(2)缺乏主要組織相容性復合體(MHC)I類和II類抗原(HLA的鼠類等同物)的小鼠已經(jīng)被廣泛研究并且除了缺少CD4⁺和CD8⁺T細胞外是健康的。重要的是，移植實驗已經(jīng)表明，來自I型陰性小鼠供體的器官或細胞在同種異體受體(包括肝細胞，腎臟，心臟和胰島)中存活更長時間(有時持續(xù)無限期)。這些小鼠實驗表明在許多用于多能干細胞的臨床環(huán)境中，HLA工程化人細胞也將比同種異體細胞存活更長時間。

每個人都有一套獨特的人類白細胞抗原(HLA)——細胞表面蛋白標志物，向免疫系統(tǒng)發(fā)出信號，表明他們是個體自身的細胞。在人群中，編碼HLA分子的基因是高度可變的——意味著每個人都有特定的HLA分子條形碼，這些條形碼是為他們的免疫系統(tǒng)定制的。HLA分為Ⅰ類和Ⅱ，在異體移植中，多種HLA I類和II類蛋白質必須與同種異體受者的組織相容性匹配。I類和II類分子都由兩部分組成。I類分子是在高變異HLA I類蛋白與另一種稱為β-2-微球蛋白(β-2-微球蛋白)的蛋白結合時形成的，后者是HLA分子到達細胞表面所必需的。當兩個高變性HLA II類分子結合在一起時，HLA II類分子到達細胞表面。這兩種類型的HLA分子都具有將其它蛋白質片段呈遞給免疫系統(tǒng)的作用。所以，敲除主要組織相容性復合體MHC I和MHC II(或HLA I和HLA II)來降低細胞的免疫原性，以避免分化成免疫細胞后宿主對移植細胞產(chǎn)生排斥反應，從而實現(xiàn)異體移植。

發(fā)明內容

為了克服這種免疫障礙，本發(fā)明的一方面提供一種通用供體干細胞，所述干細胞相對于野生型干細胞，MHC I和MHC II的表達受調節(jié)。在本發(fā)明中，MHC I和MHC II不表達是由于編碼MHC I和MHC的基因的轉錄調節(jié)因子的表達受調節(jié)。在本發(fā)明中，所述干細胞相對于野生型干細胞，還包含至少一個致耐受性因子的表達受調節(jié)。

在本發(fā)明的實施方案中，所述轉錄調節(jié)因子的表達受調節(jié)是指表達降低。

在本發(fā)明的實施方案中，所述轉錄調節(jié)因子的表達受調節(jié)是指表達受抑制。

在本發(fā)明的實施方案中，所述轉錄調節(jié)因子的表達受調節(jié)是指轉錄調節(jié)因子缺失。

在本發(fā)明的實施方案中，所述轉錄調節(jié)因子選自B2M、CIITA、RFXANK、RFX5和RFXP中的至少一種。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述調節(jié)因子為B2M和RFXANK。

在本發(fā)明的實施方案中，所述致耐受性因子的表達受調節(jié)是指表達增加。