[發(fā)明專利]一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810913796.8
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN108949666A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李娜;黃祥宏;趙成誠
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;A01N1/02
• 代理公司: 北京天盾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11421
• 代理人: 楊本官

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法。可用于篩選螢火蟲發(fā)光器細(xì)胞，建立細(xì)胞系供于研究。本發(fā)明提供的一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法，包括以下步驟：(1)將發(fā)光囊組織置于80～120ul胰酶中，剪碎；(2)在CO2恒溫箱中消化3～7min；(3)在含8％～12％FBS的Sf?900^TMIII SFM培養(yǎng)液終止消化。本發(fā)明提供的一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法，可用于篩選螢火蟲發(fā)光器細(xì)胞，建立細(xì)胞系，以用于研究螢火蟲發(fā)光原理、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)及分子生物學(xué)等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

近二十年來，我國在昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方面發(fā)展較快，但是，建成的昆蟲細(xì)胞系卻幾乎全部來源于鱗翅目和雙翅目的幾十種昆蟲的二十多株，而鞘翅目昆蟲細(xì)胞系的建立卻極少，這與鞘翅目昆蟲在昆蟲中第一大類的身份極其不符。而國際上已建立鞘翅目天牛科、葉甲科、象鼻蟲和金龜科的供十株左右鞘翅目昆蟲細(xì)胞系，所以在我國建立鞘翅目昆蟲細(xì)胞系具有很重要的意義。

鞘翅目中的螢火蟲具有極高的觀賞價值，也是一種捕捉害蟲的益蟲，目前還沒有其細(xì)胞系，篩選螢火蟲的發(fā)光器細(xì)胞系和其他細(xì)胞系，用于研究螢火蟲發(fā)光原理、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)及分子生物學(xué)等方面的研究顯得極其重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述問題，提供一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法，可用于篩選螢火蟲發(fā)光器細(xì)胞，建立細(xì)胞系供于研究。

本發(fā)明提供的一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法，包括以下步驟：

(1)將發(fā)光囊組織置于80～120ul胰酶中，剪碎；

(2)在CO2恒溫箱中消化3～7min；

(3)在含8％～12％FBS的Sf-900^TM III SFM培養(yǎng)液終止消化。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)化，包括步驟(1)之前的準(zhǔn)備步驟，如下：

用70％～80％的酒精對螢火蟲消毒，取出螢火蟲發(fā)光囊，浸泡與PBS中，在4℃的環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)化，步驟(1)中的采用小號手術(shù)剪剪至肉眼無法可見大小。

本發(fā)明還提供一種螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的凍存方法，即用胰酶消化法收集2瓶處于對數(shù)生長期的螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞，1000g離心5min后棄去上清，用1mL凍存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900^TM III SFM培養(yǎng)液將細(xì)胞重懸后置于凍存管中，將凍存管置于程序降溫盒中于-80℃過夜，最后投入-196℃液氮中長期保存，并做好記錄。

本發(fā)明還提供一種所述凍存螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的復(fù)蘇方法，即從液氮中取出凍存管，于37℃水浴中迅速解凍，1000g離心5min收集細(xì)胞后接種于25cm2的培養(yǎng)瓶中，放置于培養(yǎng)箱中27℃培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后棄上清，更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

本發(fā)明提供的一種分離螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞的方法，可用于篩選螢火蟲發(fā)光器細(xì)胞，建立細(xì)胞系，以用于研究螢火蟲發(fā)光原理、細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)及分子生物學(xué)等。

附圖說明

圖1是本發(fā)明分離出的螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞視圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)說明。

采用本發(fā)明分離出的螢火蟲發(fā)光囊細(xì)胞視圖如圖1所示。

下列實(shí)施例實(shí)施之前所需做的準(zhǔn)備工作如下：