[發明專利]一種分離螢火蟲發光囊細胞的方法

在審

• 申請號: 201810913796.8
• 申請日: 2018-08-13
• 公開（公告）號: CN108949666A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 李娜;黃祥宏;趙成誠
• 申請（專利權）人: 武漢華聯科生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;A01N1/02
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司 11421
• 代理人: 楊本官

1.一種分離螢火蟲發光囊細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將發光囊組織置于80～120ul胰酶中，剪碎；

(2)在CO2恒溫箱中消化3～7min；

(3)在含8％～12％FBS的Sf-900^TMIII SFM培養液終止消化。

2.根據權利要求1所述一種分離螢火蟲發光囊細胞的方法，其特征在于，包括步驟(1)之前的準備步驟，如下：

用70％～80％的酒精對螢火蟲消毒，取出螢火蟲發光囊，浸泡與PBS中，在4℃的環境下保存備用。

3.根據權利要求1所述一種分離螢火蟲發光囊細胞的方法，其特征在于，步驟(1)中的采用小號手術剪剪至肉眼無法可見大小。

4.一種權利要求1所述螢火蟲發光囊細胞的凍存方法，其特征在于，用胰酶消化法收集2瓶處于對數生長期的螢火蟲發光囊細胞，1000g離心5min后棄去上清，用1mL凍存含20％FBS和10％DMSO的Sf-900^TMIII SFM培養液將細胞重懸后置于凍存管中，將凍存管置于程序降溫盒中于-80℃過夜，最后投入-196℃液氮中長期保存，并做好記錄。

5.一種權利要求4所述凍存螢火蟲發光囊細胞的復蘇方法，其特征在于，從液氮中取出凍存管，于37℃水浴中迅速解凍，1000g離心5min收集細胞后接種于25cm2的培養瓶中，放置于培養箱中27℃培養，待細胞貼壁后棄上清，更換培養液，繼續培養。