[發(fā)明專利]一種脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810910346.3
• 申請日: 2018-08-10
• 公開（公告）號: CN109112094A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱建斌;江嘉豪;何美弟;陳熾峰;康斯敏;陳碧瑩;蔡祥勝;王明珠;王進輝
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東唯泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0775;A61P15/10
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 許英偉

1.一種脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細胞的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將脂肪組織清洗干凈，加入與脂肪組織等體積的組織消化酶進行消化；

(2)消化結(jié)束后再加入與組織消化酶等體積的胰蛋白酶液進行消化；

(3)消化結(jié)束后離心去除上層油脂和消化液，沉淀為脂肪組織血管基質(zhì)部分細胞；

(4)將血管基質(zhì)部分細胞用生理鹽水再次重懸并篩去大塊組織，再用生理鹽水清洗，離心去除上清液，清洗后的血管基質(zhì)細胞用無血清增殖培養(yǎng)基接種培養(yǎng)，得到脂肪間充質(zhì)干細胞；

(5)選取P3代脂肪間充質(zhì)干細胞消化得到單細胞懸液，用無血清增殖培養(yǎng)基接種培養(yǎng)過夜；

(6)培養(yǎng)24小時后去除無血清增殖培養(yǎng)基，添加誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到分化后的血管內(nèi)皮細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述組織消化酶包括生理鹽水、基于所述生理鹽水體積1mg/ml的I型膠原酶、0.5mg/ml的中性蛋白酶、0.05mg/ml的DNA酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶液的濃度為0.05％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)液包括H-DMEM、基于所述H-DMEM體積1％的正常人血清、終濃度為50ng/ml的血管內(nèi)皮細胞生長因子、終濃度為15ng/ml的堿性成纖維細胞生長因子、終濃度為10ng/ml的表皮細胞生長因子、以及終濃度為10μM的全反式維甲酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)中，所述脂肪間充質(zhì)干細胞接種于24孔板中，每孔10000個細胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)中，每孔添加1ml所述誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)10天，每3天全量換液。