[發明專利]一種PSR檢測耐甲氧西林金葡菌的引物、試劑盒與方法

有效

• 申請號: 201810909427.1
• 申請日: 2018-08-10
• 公開（公告）號: CN109355403B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 徐振波;苗健;徐行勇;劉君彥;陳定強;蘇健裕;陳玲;李曉璽;李冰;李琳
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/14;C12R1/445
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 黃瑩;宮愛鵬

本發明公開了一種PSR檢測耐甲氧西林金葡菌的引物、試劑盒與方法。本發明提供了如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示的PSR檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引物，通過檢測特異性靶序列femA及mecA，實現了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的特異、靈敏和可靠的檢測。本發明基于所述的引物，還提供PSR檢測耐甲氧西林金葡菌的試劑盒與檢測方法，所述的方法具有靈敏度高、特異性好，操作簡便快速，結果準確可靠，檢測成本低，適合現場檢測應用的特點，無需特殊、昂貴的儀器和試劑，直接用熒光染料顯色可憑肉眼判斷結果，特別適用中小型單位及現場檢測，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種PSR檢測耐甲氧西林金葡菌的引物、試劑盒與方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌是醫院和社區感染的重要致病菌，近年來隨著廣譜抗菌藥的廣泛使用，金黃色葡萄球菌的耐藥性在逐漸升高，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Meticillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)分離率日趨升高，MRSA不僅對甲氧西林耐藥，還對多種抗生素耐藥，具有多重耐藥特性，已是臨床抗感染化療的難題之一。因此，快速、準確的檢測MRSA菌株，不僅可以指導臨床選擇合適的抗生素，還有利于控制MRSA的傳播。

目前對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢測方法主要有傳統的紙片法，以及分子生物技術的PCR方法，還有以免疫學為主的酶聯免疫試劑盒和應用各類生化自動鑒定儀的檢測方法，以及最新出現的基因芯片檢測手段。常規檢測鑒定方法工作量相對較大，且檢測結果一般4～5天才能得出結果，耗時長，根據實驗現象判斷鑒定結果，很難滿足快速鑒定的需要。近年發展起來的基因芯片檢測及PCR擴增方法具有較強的特異性、快速、靈敏，但是成本較高。免疫學檢測方法，如ELISA，免疫層析等，靈敏度高，但是操作過程復雜，成本偏高，不宜于大規模檢測樣品。目前應用最廣泛的恒溫擴增技術-LAMP也有它的局限性，如引物設計復雜、假陽性率高、試劑價高偏高，且由于日本知識產權的保護，我國在轉化應用上局限性強。聚合酶螺旋反應(Polymerase Spiral Reaction,PSR)技術與其他核酸擴增技術相比，可以在等溫條件下快速、高效、特異地擴增靶序列，且操作簡便，不需要精準的變溫設備，成本較低，在食源性微生物檢測領域顯示出廣闊的發展前景。

要實現有效地利用PSR技術，合適的引物設計是研發關鍵；同時，由于PSR一般通過顯色直接進行結果判讀，顯色體系對于整個PSR擴增反應結果判讀具有重要的影響，而在本領域的研發實踐中如何通過簡單的顯色實現準確、快速的結果判讀也是目前亟需攻克的技術難題。

因此，建立一種針對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌新型的具有獨立知識產權的等溫核酸擴增方法具有重要的意義。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種PSR等溫擴增反應檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引物。

本發明的另一目的在于提供一種PSR等溫擴增反應檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的試劑盒。

本發明的又一目的在于提供一種PSR等溫擴增反應檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法。該方法具有靈敏度高、特異性好，操作簡便快速，結果準確可靠，檢測成本低，適合現場檢測應用的特點。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一組PSR等溫擴增反應檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的兩個靶點femA及mecA的引物，包括檢測引物Ft和檢測引物Bt，其核苷酸序列如下所示：

靶點femA檢測引物Ft:

5’-AGGTATAGACTTCGATGTTTCAAATCGCGGTCCAGTG-3’(SEQ ID NO.1)；

靶點femA檢測引物Bt：