[發(fā)明專利]一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810909231.2
• 申請日: 2018-08-10
• 公開（公告）號: CN108828117B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭靖怡;王朝陽;王寧;鄭文郁;董英英;任海波;夏學(xué)蓮;李嚴(yán)生;周鵬飛;李輝;郭冰;楊會舉;倪明
• 申請（專利權(quán)）人: 河南城建學(xué)院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發(fā)明屬于真菌毒素提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法，干燥粉碎，水超聲提取后加入體積濃度為1.5％?3％甲酸的乙腈混合液和鹽析劑，混勻后超聲提取，然后800r/min條件下離心過濾；再加入濃縮劑振搖后2000?2500r/min條件下離心3?8min；加入氧化鋁離心后氮?dú)獯蹈桑僖译嫠芤喝芙猓^0.25μm濾膜。本發(fā)明對粉碎后的中藥材經(jīng)兩次超聲提取，依次經(jīng)粗提、濃縮富集、除雜純化步驟使提取的中藥中的真菌毒素溶液純度高，液質(zhì)聯(lián)用檢測結(jié)果質(zhì)量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于真菌毒素提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法。

背景技術(shù)

我國是中藥的發(fā)源地，運(yùn)用中藥防病治病歷史悠久，有豐富的臨床經(jīng)驗，但由于我國對中藥生產(chǎn)過程缺乏監(jiān)管力度，使中藥在國際上的競爭力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于人們預(yù)期。近年來，隨著中藥材在國際市場上的持續(xù)升溫，其安全性越來越引起人們的關(guān)注。中藥中存在的有害物質(zhì)主要有重金屬、真菌毒素、農(nóng)藥殘留，它們主要來自于藥用植物在生長過程中接觸被污染的土壤、水、大氣等自然環(huán)境，也可能是由于不當(dāng)炮制、加工、運(yùn)輸、貯藏等所造成，其中，真菌毒素的問題日益突出。真菌毒素殘留作為中藥材微量外源性有毒有害物質(zhì)，一般不表現(xiàn)出急性毒性，但通常有較強(qiáng)的蓄積性，致癌、致畸、致突變作用明顯，嚴(yán)重影響中藥材的安全性。

液質(zhì)聯(lián)用(HLPC-MS)，又稱液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，它以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)，樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補(bǔ)，將色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點結(jié)合起來，用以同時鑒定多種物質(zhì)及結(jié)構(gòu)。

液質(zhì)聯(lián)用檢測方法是現(xiàn)有對藥材、食物中真菌毒素的常用檢測方法，檢測前都需對待檢測樣品進(jìn)行真菌毒素的提取過程，現(xiàn)有關(guān)于中藥材真菌毒素提取的文獻(xiàn)不多，且提取過程偏粗簡，存在液質(zhì)聯(lián)用檢測結(jié)果差異較大的情況。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明對粉碎后的中藥材經(jīng)兩次超聲提取，依次經(jīng)粗提、濃縮富集、除雜純化步驟使提取的中藥中的真菌毒素溶液純度高，液質(zhì)聯(lián)用檢測結(jié)果質(zhì)量高。

本發(fā)明提供了一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法，包括以下步驟：

S1，稱取固體樣品中藥，60-70℃下干燥1-1.5h，粉碎并過300目篩，得中藥粉末；

S2，在S1藥粉末中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量3-5倍的水，浸泡20-30min后第一次超聲提取，然后加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量2-4倍體積濃度為1.5％-3％甲酸溶液，甲酸溶液中溶劑是乙腈，渦旋混勻，然后加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量0.5％-1％的鹽析劑，第二次超聲提取，然后800r/min條件下離心過濾，保留上清液，得粗提真菌毒素溶液；

S3，在S2真菌毒素溶液中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量4％-9％的濃縮劑，振搖1-3min，2000-2500r/min條件下離心3-8min，保留上清液得濃縮真菌毒素溶液；

S4，在S3濃縮真菌毒素溶液中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量1％-5％的氧化鋁，振搖，3500-4000r/min條件下離心2min，取上清液然后于40-55℃下氮?dú)獯蹈桑儆皿w積濃度為5％-8％的乙腈水溶液溶解，過0.25μm濾膜后，濾液為適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的真菌毒素溶液。

優(yōu)選的，S2中第一次超聲提取條件為400W、40-50℃，時間為20-25min。

優(yōu)選的，S2中第二次超聲提取條件為400W、55-60℃，時間為10-15min。

優(yōu)選的，S2中鹽析劑為氯化鈉、檸檬酸三鈉二水結(jié)晶鹽和檸檬酸氫二鈉半水結(jié)晶鹽按照質(zhì)量比2：3：1混合成的混合物。