[發(fā)明專利]一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810909231.2 | 申請日： | 2018-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN108828117B | 公開（公告）日： | 2021-10-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭靖怡;王朝陽;王寧;鄭文郁;董英英;任海波;夏學(xué)蓮;李嚴(yán)生;周鵬飛;李輝;郭冰;楊會舉;倪明 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南城建學(xué)院 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14 |
| 代理公司： | 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 467000 *** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 適用于 聯(lián)用 檢測 中藥 真菌 毒素 提取 方法 | ||
1.一種適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的中藥中真菌毒素提取方法，其特征在于，所述真菌毒素包括黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素B1內(nèi)標(biāo)、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素A內(nèi)標(biāo)、T-2毒素、T-2毒素內(nèi)標(biāo)、霉酚酸MPA、玉米赤霉烯醇ZAN、玉米赤霉烯酮ZEN、玉米赤霉烯酮內(nèi)標(biāo)、嘔吐毒素DON和嘔吐毒素內(nèi)標(biāo)；
所述提取方法包括以下步驟：
S1，稱取固體樣品中藥，65℃下干燥1.3h，粉碎并過300目篩，得中藥粉末；
S2，在S1藥粉末中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量4倍的水，浸泡25min后第一次超聲提取，第一次超聲提取條件為400W、23℃，時間為23min，然后加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量3倍體積濃度為2%甲酸溶液，甲酸溶液中溶劑是乙腈，渦旋混勻，然后加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量0.8%的鹽析劑，第二次超聲提取，第二次超聲提取條件為400W、58℃，時間為12min，然后800r/min條件下離心過濾，保留上清液，得粗提真菌毒素溶液；鹽析劑為氯化鈉、檸檬酸三鈉二水結(jié)晶鹽和檸檬酸氫二鈉半水結(jié)晶鹽按照質(zhì)量比2：3：1混合成的混合物；
S3，在S2的粗真菌毒素溶液中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量4%-9%的濃縮劑，振搖1-3min，2000-2500r/min條件下離心4min，保留上清液得濃縮真菌毒素溶液；濃縮劑為聚山梨酯20、十二烷基硫酸鈉、碳酸鈉、乙酸鉀按照質(zhì)量比1：3：2：3混合成的混合物；
S4，在S3濃縮真菌毒素溶液中加入相當(dāng)于S1中樣品質(zhì)量3%的氧化鋁，振搖，3700r/min條件下離心2min，取上清液然后于50℃下氮?dú)獯蹈桑儆皿w積濃度為6%的乙腈水溶液溶解，過0.25μm濾膜后，濾液為適用于液質(zhì)聯(lián)用檢測的真菌毒素溶液；
檢測過程如下：
色譜條件：Waters BEH-C18色譜柱，100×2 .10mm，1 .7μm ；流動相為甲醇B -5mmol/L醋酸銨A ，梯度洗脫，此處百分比為有機(jī)相B相：0-6min，25％；6-8min，70％-95％；8-8.5min，95％-100％；8 .5-9 .5min，100％；9 .5-9 .6 min，100％-25％；9 .6-12min，25％，流速：0 .3mL·min-1；柱溫40℃；進(jìn)樣量1μL；
質(zhì)譜條件：質(zhì)譜檢測采用正負(fù)兩種離子模式，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)控模式檢測。
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